Resumen de Sistema cannabinoide y regulación neuroinmune en un modelo viral de esclerosis múltiple estudio de la familia de citoquinas heterodiméricas IL-12/IL-23
ÍNDICE: SUMMARY INTRODUCCIÓN 1. Interacción entre el sistema nervioso central y el sistema inmune.
1.1 La microglía como componente esencial de la inmunidad innata dentro del SNC.
2. Neuroinflamación y patologías inflamatorias del SNC.
2.1 La familia de citoquinas heterodiméricas como componentes esenciales del paso de la inmunidad innata a la adquirida dentro del SNC.
3. Esclerosis múltiple.
3.1 Infección con el virus de Theiler como modelo de esclerosis múltiple.
3.2 Neuropatología comparativa entre la TMEV-IDD y la EM.
3.3 Cannabinoides y EM.
4. Sistema cannabinoide endógeno.
4.1 Receptores.
4.2 Ligandos.
4.3 Biosíntesis y degradación de los endocannabinoides.
4.4 Mecanismos de transducción de señal de los receptores cannabinoides.
4.5 Fisiología del sistema cannabinoide endógeno.
OBJETIVOS MATERIALES Y MÉTODOS 1. Animales.
1.1 Inoculación de los animales con el virus de Theiler.
1.2 Estudios conductuales.
1.3 Tratamientos.
1.4 Cirugía para la implantación de las minibombas osmóticas.
1.5 Obtención de la médula espinal y su procesamiento para inmunohistoquímica.
1.6 Inmunohistoquímica.
1.7 Determinación de los niveles de endocannabinoides en médula espinal por HPLC-MS.
2. Cultivos celulares.
2.1 Cultivos primarios.
2.1.1 Cultivos de microglía de ratón.
2.1.2 Cultivos de macrófagos peritoneales de ratón.
2.1.3 Cultivos de microglía humana.
2.2 Cultivos de líneas celulares.
2.3 Tratamientos celulares.
2.4 Infección in vitro de cultivos de microglía y de macrófagos con el virus de Theiler.
2.5 Inmunocitoquímica.
2.6 Citometría de flujo.
3. Técnicas de inmunodetección por separación electroforética de proteínas (Western Blot).
4. Enzimoinmunoensayos en fase sólida (ELISAs).
5. Reacción de cadena de la polimerasa (PCR).
5.1 PCR convencional.
5.2 PCR cuantitativa (qPCR).
6. Transfecciones.
6.1 Plásmidos.
6.2 Ensayo de luciferasa.
6.3 Ensayo de oligonucleótidos señuelo (Decoy oligonucleotides assay).
7. Estadística.
RESULTADOS 1. Efecto de los inhibidores de la recaptación de endocannabinoides, OMDM1 y OMDM2, en la encefalomielitis por infección con el virus de Theiler (TMEV-IDD) como modelo de esclerosis múltiple.
1.1 El tratamiento con OMDM1 u OMDM2 mejora las funciones motoras en animales con deficiencias neurológicas establecidas.
1.2 Los compuestos OMDM1 y OMDM2 reducen la activación de macrófagos/microglia in vivo.
1.3 Los compuestos OMDM1 y OMDM2 modulan la activación macrofágico/microglial in vitro.
2. Efecto de la administración in vivo de AEA, metanandamida (Met-AEA) y del inhibidor de la FAAH, el araquidonoilserotonina (AA-5HT) en el modelo de Theiler.
2.1 Patrón bifásico del curso temporal de expresión de las subunidades p35, p40 y p19 en la médula espinal de ratones infectados con TMEV.
2.2 El tratamiento subcrónico con AEA, con Met-AEA o con AA-5HT reduce la expresión de los ARN mensajeros de las subunidades p35, p19 y p40 a los 90 días post-infección.
3. Mecanismos moleculares implicados en la regulación de IL-12 e IL-23 por AEA.
3.1 AEA limita la producción en microglía de IL-12 e IL-23 (y sus subunidades) en respuesta al TMEV y a LPS/IFN¿.
3.2 El agonista selectivo CB2 JWH-133 regula negativamente la expresión de IL-12p40.
3.3 AEA regula de manera diferencial la expresión de IL-12 y de IL-23: participación de las vías de ERK1/2 y JNK.
3.4 El aumento del tono endógeno de AEA regula la expresión de IL-12 e IL-23.
4. AEA potencia la síntesis de IL-10: evidencias de una regulación autocrina de IL-10 endógena sobre la producción de IL-12.
4.1 AEA potencia la producción de IL-10 inducida por la infección in vitro con TMEV y por LPS/IFN¿: participación del receptor CB2.
4.2 Mecanismos moleculares de acción de AEA sobre la producción de IL-10.
4.3 La producción endógena de IL-10 regula de manera autocrina la síntesis de IL-12 e IL-23.
4.4 El aumento del tono endógeno de AEA regula la expresión de IL-10.
5. Mecanismos independientes de receptores cannabinoides en la regulación de IL-12p40 por AEA.
5.1 Modificación de los niveles de CB2 en microglía activada.
5.2 AEA reduce la actividad del promotor de IL-12p40 mediante la activación del elemento represor GA-12 por un mecanismo independiente de receptores cannabinoides y vanilloides.
5.3 Interacciones entre AEA y COX-2: inhibición de la actividad del promotor de IL-12p40 por prostamida E2 y participación del receptor prostanoide EP2.
