Estudio del potencial proangiogénico de células mesenquimales indiferenciadas de origen adiposo activadas por estímulo mecánico
- Autores: Beatriz Bravo Molina
- Directores de la Tesis: Fernando Vidal Vanaclocha (dir. tes.), Arancha Rodríguez de Cortázar Alonso Villalobos (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad CEU San Pablo ( España ) en 2014
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Antonio José Torres García (presid.), Francisco Forriol Campos (secret.), Alfredo Martínez Ramírez (voc.), Josefa Predestinación García Ruiz (voc.), José Manuel Pozuelo González (voc.)
- Materias:
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- Resumen
El estímulo mecánico y el estrés oxidativo inducido por factores proinflamatorios son circunstancias fisiopatológicas del microambiente de la lesión tisular que operan durante sus respuestas reparativas, induciendo entre otras cosas una respuesta proangiogénica en tejidos conectivos y de sostén. Sin embargo, se desconoce si los efectos del estímulo mecánico y el estrés oxidativo operan también en la subpoblación inmadura de las células progenitoras mesenquimales de origen adiposo, activando su fenotipo funcional proangiogénico, y si su acción está interrelacionada por ser ambos, estimulación mecánica y estrés oxidativo, factores activadores de la defensa y regeneración corporal.
El presente proyecto pretende establecer un protocolo estandarizado de laboratorio para la obtención y caracterización funcional de cultivos primarios de llamadas células madre adiposas o ASCs a partir del disgregado celular de muestras humanas de lipoaspirado subcutáneo. A continuación, pretende estudiar la respuesta proangiogénica de las ASCs a la acción de la hipoxia, el estrés oxidativo y el estímulo mecánico; y finalmente, analizar las interrelaciones entre estímulo mecánico y estrés oxidativo en sus efectos reguladores proangiogénicos. La citometría de flujo de los cultivos primarios obtenidos demostró la expresión de CD90, CD44 y CD29, en ausencia de CD45, CD34 y CD106, sugiriendo su naturaleza mesenquimal indiferenciada, compatible con las ASCs. Así mismo, la respuesta a medios suplementados con factores osteogénicos y adipogénicos demostró la conservación del potencial de las ASCs en su diferenciación mesenquimal a osteoblastos y adipocitos. El estímulo mecánico de ASCs produjo un incremento en su secreción de moléculas proangiogénicas, y el medio condicionado obtenido de ASCs en dichas condiciones funcionales incrementó la migración de células endoteliales humanas procedentes de cordón umbilical, apoyando el efecto proangiogénico del estímulo mecánico sobre las ASCs. El cultivo de ASCs en condiciones de estrés oxidativo, inducido mediante depleción de glutation también incrementó la secreción de algunas moléculas proangiogénicas solubles (HGF, Leptina, IL-8, PDGF-BB y Angiopoyetina), no afectando a la secreción de VEGF, Folistatina y G-CSF. Este estrés oxidativo impidió la respuesta estimulante de la secreción de VEGF, Folistatina y CSF-G del estímulo mecánico en ASCs. En cambio, el estímulo mecánico neutralizó el efecto estimulante de la secreción de HGF, Leptina, PDGF-BB, Angiopoyetina-2 e IL-8 del estrés oxidativo. Más aún, la ciclooxigenasa-2 reguló la producción de CSF-G, VEGF, IL-8, PDGF-BB, HGF, Angiopoyetina-2, Folistatina y Leptina tras el estímulo mecánico. Los resultados demuestran el potencial proangiogénico de las células mesenquimales indiferenciadas de origen adiposo activadas por estímulo mecánico. El estrés oxidativo inhibió en parte dicha respuesta, mientras que el mismo estímulo mecánico inhibió los efectos proangiogénicos del estrés oxidativo sugiriendo que tales circunstancias fisiopatológicas microambientales actuaron de forma interdependiente en la regulación de sus efectos proangiogénicos.
