Resumen de Caracterizacion y regulacion de subtipos de receptores serotonergicos
La relevancia que supone el descubrimiento de nuevos receptores serotonérgicos para su aplicación en enfermedades que cursan con alteraciones del sistema serotonérgico ha llevado a una gran expansión en la identificación de nuevos subtipos de receptores. Otro punto importante, también encaminado a una aplicación terapéutica es el estudio de la regulación de receptores serotonérgicos en determinadas patologías del SNC. Ante estas consideraciones nos planteamos dos objetivos claramente diferenciados: Caracterización de posibles nuevos receptores 5-HT y Regulación de los subtipos 5-HT1A, 5-HT1B y 5-HT7.
Para el primer objetivo se aplicaron dos técnicas de clonado por homología. La primera fue el rastreo de uangenoteca de cDNA de hipocampo humano a baja astringencia empleando como sonda el gen codificador del receptor 5-ht1f de ratón. Se llegó al aislamiento de 108 clones positivos, 5 de los cuales correspondían a subtipos de receptores serotonérgicos de la familia 5-HT1 ya caracterizados. La segunda estrategia empleada fue la aplicación de la PCR anidada para amplificar una genoteca de cDNA de corteza frontal humana empleando como amplímeros oligonucleótidos degenerados diseñados teniendo en cuenta los aminoácidos más conservados entre los receptores serotonérgicos.
Se amplificó un fragmento correspondiente al receptor 5-HT1A que presentaba una mutación localizada al comienzo del segmento transmembrana IV. Esta mutación había sido detectada por otros autores y parece corresponder a una variante de este receptor.
Para el estudio de la regulación de los subtipos de receptores serotonérgicos se emplearon las neurotoxinas selectivas del sistema serotonérgico para-Cloroanfetamina (PCA) y 3,4-Metilendioximetamnfetamina (MDMA o éxtasis). El efecto de las neurotoxinas se estudió tras administración aguda y crónica a ratas y en cultivos primarios de embriones de rata. Se encontraron modificaciones en la exp
