Análisis mutacional del centro activo exonucleasa 3'-5' de la DNA polimersa del bacteriófago ²29

• Autores: José Miguel de Vega
• Directores de la Tesis: Luis Blanco Dávila (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 1998
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Antonio Bernad Miana (secret.), Esteban Domingo Solans (voc.), Ramón Díaz Oreja (voc.), José María Almendral del Río (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
    • Virología
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• Resumen

  • En este trabajo se ha podido relacionar la conservación evolutiva de varios residuos de aminoácidos con su importancia funcional como ligandos de DNA de cadena sencilla como sustrato de la actividad exonucleasa 3'-5'. Quizás, más importante aún, ha sido la identificación y caracterización funcional de un residuo de lisina específicamente implicado en la catálisis de la reacción, y que es invariante en las DNA polimerasas de tipo ecuariótico. Gracias al análisis bioquímico de mutantes puntuales en los residuos anteriormente comentados, hemos podido definir con precisión la implicación de éstos en conferir a la DNA polimerasa la óptima capacidad correctora de errores, garantizando la fidelidad de síntesis. Por otra parte, hemos demostrado el papel dual de alguno de los residuos anteriores de la DNA polimerasa de 029, como ligandos del iniciador específico de ésta, la proteína terminal, permitiéndose proponer un modelo de interacción entre ambas proteínas en las primeras etapas de la replicación. Finalmente, hemos demostrado que la DNA polimerasa de 029 transfiere el extremo 3' de la cadena iniciadora de DNA entre sus centros activos de polimerización y exonucleolisis de manera intramolecular, suponiendo una solución óptima para la coordinación necesaria que ha de existir entre ambas actividades cuando se lleva a cabo la replicación del DNA de manera procesiva.