Resumen de Clonacion y valoracion funcional del nimunogen mx de lenguado (solea senegalensis)
Maria Alejandra Fernandez Trujillo
El lenguado senegalés es una especie de gran interés para la Acuicultura del Sur de Europa. La aparición de patologías dificulta su producción industrial, por lo que es necesario el estudio de su respuesta inmune para abordar estrategias de lucha contra las infecciones. La protelna Mx tiene propiedades antivirales y ha sido estudiada en otras especies con resultados prometedores. El objetivo de este trabajo consistió en el estudio del inmunogen Mx de Solea senegalensis a nivel genómico, de expresión y funcional, para lo cual era necesaria la clonación y caracterización de su cDNA, la determinación del número de copias de este gen en el genoma de lenguado, asi como la clonación y caracterización de su secuencia genómica, el establecimiento de su patrón de expresión in vivo, a nivel basal y bajo condiciones de inmunoestimulación con poli l:C e infección vírica experimental, y la determinación de su actividad antiviral mediante el establecimiento de un sistema de expresión in vitro de la proteína. La secuencia completa del cDNA presentó 2322 nucleótidos que codificaban para una protelna de 623 aminoácidos. Presenta la estructura típica de las proteínas Mx y carecía de señal de localización nuclear. Los porcentajes de identidad más altos los presentaba con las proteínas Mx de peces Pleuronectiformes, lo cual fue corroborado también en el análisis filogenético. En el genoma del lenguado existe una única copia del gen de Mx y su secuencia consta de 8273 pb, dividida en 12 exones y 11 intrones. Su estructura está bastante conservada en comparación con otras especies. Se ha detectado una expresión basal de la protelna Mx en bazo, riñon cefálico, hígado, branquias e intestino, que puede estimularse con poli l:C, dando una respuesta temprana e intensa, y con solevirus, el agente causal de la necrosis pancreática en lenguado, dando una respuesta tardía y moderada. La estimulación de la Mx in vivo mediante poli l:C promueve un estado antiviral que interfiere en la replicación del solevirus, encontrándose una relación inversa entre el nivel de expresión de la protelna Mx y el de la protelna VP2 del solevirus en los animales tratados. La protefna Mx recombinante de lenguado senegalés expresada en la línea celular de salmón CHSE-214 presenta localización cttoplasmática, y ha mostrado actividad antiviral directa frente a solevirus. Su sobreexpresión en cultivos celulares retrasa la aparición de efectos átopáticos, aumenta la supervivencia celular y disminuye el titulo vírico en el sobrenadante. La protefna Mx de lenguado se revela por tanto como una pieza clave en su respuesta antiviral, perfilándose como excelente candidata a formar parte del diseño de estrategias de mejora de la resistencia de los animales cultivados a infecciones víricas.
