Fenotipo glucolítico en células tumorales: papel de la isoenzima ubicua de la 6-fosfofructo-2-quinasa/fructosa-2,6-bisfosfatasa (upfk-2) y del regulador de la glucólisis y la apoptosis inducido por tp53 (tigar)
- Autores: María Nieves Calvo Vidal
- Directores de la Tesis: Ramón Bartrons Bach (dir. tes.), Anna Manzano Cuesta (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2009
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Lisardo Boscá (presid.), Maria Isabel Fabregat Romero (secret.), Cristina Muñoz-Pinedo (voc.)
- Materias:
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- Resumen
1) TIGAR es inducido por p53 ante un estrés leve pero también se expresa de forma p53-independiente en, al menos, varias líneas celulares cancerígenas. Su actividad fructosa-2,6-bisfosfatasa conduce al desvío de intermediarios glucolíticos hacia la vía de las pentosas fosfato, con lo que contribuye a la generación de glutatión reducido, que protege a las células de la apoptosis asociada a ROS. No obstante, en algunos tipos celulares muy dependientes de la glucosa, esa inhibición puede ser deletérea.
2) La silenciación de uPFK-2 en células HeLa conduce a una reducción de los niveles de Fru-2,6-P2 de un 20-30%, mientras los de lactato y ATP se reducen en alrededor de un 20%. La silenciación de TIGAR incrementa en un 100% los niveles de Fru-2,6-P2 de células p53+/+ U2OS, mientras en HeLa el incremento es muy leve o nulo, y tampoco se alteran los niveles de lactato.
3) Al silenciar uPFK-2, tiende a aumentar la respiración mitocondrial acoplada y desacoplada de células HeLa, mientras la capacidad respiratoria se mantiene como en el control negativo. La silenciación de TIGAR no afecta a parámetros respiratorios de HeLa.
4) La silenciación de uPFK-2 en células HeLa reduce en un 30-40% su tasa de crecimiento dependiente de anclaje, en un 60-80% su capacidad de crecimiento independiente de anclaje y en un 30% la viabilidad celular. La silenciación de TIGAR en células HeLa reduce en un 15-20% su tasa de crecimiento dependiente de anclaje, no afecta a su capacidad de crecimiento independiente de anclaje y reduce su viabilidad celular en sólo un 10%.
5) La silenciación de uPFK-2 causa un 20-25% de apoptosis temprana. La silenciación de TIGAR sólo causa un ligero aumento de la apoptosis basal. En cambio, la silenciación simultánea de uPFK-2 y TIGAR reduce la apoptosis temprana y aumenta la apoptosis tardía y necrosis, respecto a la silenciación única de uPFK-2. La apoptosis al silenciar uPFK-2 se corresponde con un incremento del mRNA de NOXA y una disminución del mRNA de BCL-2.
6) La silenciación de uPFK-2 o de TIGAR no afecta a marcadores de autofagia como LC3-II, ATG5, BECLINA-1, BNIP3 O BNIP3L 7) La silenciación de uPFK-2 dificulta la progresión del ciclo celular de la fase G1 a la S, incrementa la actividad b-galactosidasa asociada a senescencia y confiere morfología senescente a células HeLa. La silenciación de TIGAR también aumenta la actividad b-galactosidasa asociada a senescencia de HeLa pero la morfología es diferente a la descrita para células senescentes.
8) La silenciación de uPFK-2 causa un importante incremento de los niveles de TIGAR de forma independiente de p53.
9) La silenciación de uPFK-2 conduce a la activación de la vía de mTORC1 y mTORC2. La silenciación de TIGAR sólo provoca la hiperfosforilación de p70S6K1 en su T421/S424 y un ligero aumento de la fosforilación de la proteína ribosomal S6. El tratamiento con rapamicina revela que es probable que al menos parte de estas actividades sean independientes de mTORC1.
