Resumen de Deciphering the transcriptome and additional roles of sox11 in mantle cell lymphoma
El linfoma de células del manto (LCM) es una neoplasia de células B maduras altamente agresiva e incurable que se caracteriza principalmente por la translocación t(11;14)(q13;q32) que da lugar a la sobreexpresión de ciclina D1. La mayoría de los casos de LCM presentan una enfermedad diseminada y frecuentes recaídas a pesar de la buena repuesta inicial al tratamiento, permaneciendo incurables con las terapias actuales. Sin embargo, un subgrupo de pacientes de LCM ( "'20%) destaca por un curso cHnico indolente, larga supervivencia Incluso sin tratamiento en el momento del diagnostico y una enfermedad leucémica y no nodal (nnLCM). SOXll se sobreexpresa en la mayoría de los casos de LCM convencionales (cLCM) incluyendo aquellos casos ciclina D1-negativos, pero no se expresa en nnLCM. SOXll se ha identificado sobreexpresado únicamente en LCM en comparación con otros llnfomas Non-Hodgkins (LNH) Recientemente, hemos demostrado que SOX11 promueve el crecimiento tumoral en un modelo de xenotransplante de MCL en ratón. Hemos identificado que SOXll se une y activa la expresión de el gen PAXS alterando el programa de diferenciación terminal de las célula-B y también el gen PDGFA promoviendo la angiogénesis tumoral. Además, hemos observado que SOX11 directamente regula e Induce la expresión de los genes CXCR4 y FAK promoviendo el anidamiento, la invasión y aumentando la resistencia a drogas mediada por la adhesión celular (CAM-DR) en MCL. En general, estos resultados demuestran el potencial oncogénico de SOX11 y sugieren que SOXll desempeña un papel crucial en el desarrollo y agresividad del LCM.
El nnLCM ha sido asociado con presencia de mutaciones somáticas en los genes IGHV, y la presencia de IGHV hipermutadas en MCL también ha sido relacionada con baja o falta de expresión de SOX11.Nuestro primer objetivo fue evaluar una posible función de SOX11 en el proceso de diferenciación de las células de LCM a través del centro germinal (CG) y la posterior hipermutación somatica (HMS) de los genes IGHV.
Observamos que SOXll se une directamente a la reglón reguladora situada en el exón uno de BCL6. Demostramos que el dominio de unión HMG de SOXll es necesario para que SOX11 se una específicamente a la región reguladora de BCL6. El sllenciamiento de SOXll en líneas celulares de LCM indujo la expresión de BCL6. Por otro lado, en líneas celulares derivadas del CG que normalmente expresan BCL6, observamos una disminución de los niveles de proteína de BCL6 tras la sobreexpresión de SOXl 1. En conjunto, los resultados obtenidos indican que la represión de BCL6 por parte de SOXll puede interrumpir la diferenciación de las células B a través del CG en el LCM. BCL6 normalmente no se expresa en LCM, aunque algunos casos con expresión de BCL6 han sido descritos. En una serie de casos de cLCM y nnLCM, evaluamos los niveles de mRNA y proteicos de BCL6 y ambos fueron muy bajos o negativos. Los casos de LCM expresan BCL6 de manera anormal debido a translocaciones o amplificaciones, mecanismos que es probable sobrepasen el efecto inhibidor de SOXll. Para adquirir un conocimiento mayor del origen celular de los casos de LCM SOX11-negativos IGHV-mutados, analizamos mutaciones en CCNDl y BCL6 en unos pocos casos de LCM SOXll-negativos. Las mutaciones encontradas seguían un patrón que sugerían que estas células habían experimentado HMS.
La sobreex resión de CCND1 es necesaria ero no suficiente ara la transformación neoplásica en LCM y requiere de alteraciones genéticas secundarias que puedan colaborar con cicllna D1 y la sobreexpresión de SOXll en la agresividad del LCM. Nuestro segundo objetivo fue identificar alteraciones en el transcriptoma del LCM que puedan estar contribuyendo a su heterogeneidad y tumorigenicidad empleando la técnica paired-end RNA-sequencing (RNA-seq). Como resultado, hemos sido capaces de describir el amplio panorama de los transcritos de fusión en LCM. Obtuvimos 60 posibles transcritos de fusión específicos de tumor a partir de los resultados de RNAseq, de estos fuimos capaces de validar 21 en las muestras de LCM mediante RT-PCR y secuenciación Sanger. Seis de las 21 quimeras fueron adicionalmente analizadas en una serie mas amplia de casos de LCM. De manera interesante, entre los 21 transcritos de fusión específicos de tumor identificados, varios resultaron en proteínas truncadas e incorporaban genes supresores de tumores. Otros, podrían dar lugar a una proteína quimérica con posible capacidad oncogénica. Analizamos la expresión de los transcritos de fusión y observamos que los transcritos quiméricos se expresan a niveles bajos mientras que los genes que participan en estos transcritos de fusión están altamente expresados. Únicamente observamos modificaciones en la expresión del gen PTPRD, que alcanzaba valores de expresión similares a UHRF2. Ambos genes participan en el transcrito de fusión UHRF2-PTPRD. El gen PTPRD, que no se expresa en células de LCM, se encuentra sobreexpresado a consecuencia de una inversión en la cual los exones siete a 45 de PTPRD se fusionan a la región promotora de UHRF2, aunque el transcrito de fusión resulta en una proteína truncada.
En general, los resultados de nuestro trabajo resaltan el papel importante que SOX11 desempeña en la biología del LCM. Muestran como SOXll bloquea la diferenciación de la célula B mediante la represión de la expresión de BCL6 y por lo tanto impidiendo que las células B experimenten la reacción del CG. Por primera vez, hemos mostrado la diversidad de transcritos de fusión presente en LCM. El mecanismo que resulta en estos transcritos de fusión, así como las funciones que llevan a cabo en la patogénesis del LCM todavía requieren ser comprendidas ya que podrían colaborar con las mutaciones "driver" y las alteraciones cromosómicas en la tumorigénesis del LCM. Además, sería interesante investigar más en detalle la relevancia de los transcritos de fusión descritos en la prognosis de los pacientes.
