Inmunofenotipo y perfil transcriptómico de pacientes con esclerosis múltiple tratados con fingolimod. Diseño de un modelo de predicción de respuesta. Estudio traslacional a 2 años
- Autores: Irene Moreno Torres
- Directores de la Tesis: Juan Antonio García Merino (dir. tes.), José Antonio Sánchez López (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2019
- Idioma: español
- Número de páginas: 251
- Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Antonio Vargas Núñez (presid.), Carmen Guaza Rodriguez (secret.), Manuel Comabella López (voc.), Roberto Alvarez Lafuente (voc.), Luisa María Villar Guimerans (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Neurociencia por la Universidad Autónoma de Madrid
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
- Resumen
La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria crónica del SNC que se caracteriza por la aparición de placas de desmielinización en la sustancia blanca y gris, inflamación parenquimatosa y perivascular, daño axonal y gliosis. Se piensa que es una enfermedad autoinmune pero la etiología es aún desconocida. Se conocen varios factores ambientales y genéticos implicados en su patogénesis como la presencia del haplotipo HLA-DR2, la infección previa por el virus de Epstein Barr (VEB) o el tabaquismo. La forma más frecuente de la enfermedad es la forma remitente recurrente (EMRR) que cursa con episodios de discapacidad neurológica llamados brotes alternados con periodos de remisión clínica parcial o completa. La inflamación crónica y el daño axonal lleva a la acumulación de discapacidad y atrofia cerebral.
El fingolimod es uno de los 13 fármacos comercializados actualmente como tratamientos modificadores de la enfermedad (TMEs) para la EM. El mecanismo de acción principal de fingolimod es la retención en los ganglios linfáticos de los linfocitos activados cuya salida del ganglio linfático depende de la señalización de la esfingosina 1 fosfato (S1P) y su receptor S1P1. A pesar de haber demostrado una eficacia en la disminución de los brotes, la aparición de nuevas lesiones en resonancia magnética (RM) y la acumulación de discapacidad, algunos pacientes no presentan una adecuada respuesta clínica durante el tratamiento con fingolimod.
El objetivo de este trabajo es la búsqueda de un conjunto de biomarcadores que permitan la identificación precoz de pacientes respondedores y no respondedores a fingolimod con el fin de disminuir el riesgo de acumulación de discapacidad en aquellos con altas probabilidades de una respuesta subóptima acercándonos a una medicina personalizada. Para la consecución de este objetivo, se reclutaron 40 pacientes con diagnóstico de EMRR que iban a comenzar tratamiento con fingolimod según la práctica clínica habitual y se siguieron durante 2 años con exploración neurológica semestral y RM anual determinando la respuesta al fingolimod. Se definió el grupo de pacientes respondedores como aquellos que alcanzaban los estados NEDA-3 (no evidence of disease activity) y NEDA-4 a 1 y 2 años. Adicionalmente, se obtuvieron muestras de sangre de estos pacientes antes del comienzo del tratamiento y a los 6 meses desde su inicio. También se obtuvieron muestras de pacientes con EM que no habían recibido aún ningún tratamiento (naïve) e individuos sanos que fueron usados como controles.
Se caracterizaron 48 subpoblaciones linfocitarias B, T y NK en los 40 pacientes antes y después del tratamiento, así como en los grupos control mediante citometría de flujo. Mediante un análisis de regresión logística se determinó que los pacientes respondedores presentaban mayores porcentajes de células NK bright y plasmablastos pre-tratamiento que los no respondedores.
Adicionalmente, se realizó la secuenciación del transcriptoma en las PBMCs de 10 pacientes (5 respondedores y 5 no respondedores al fingolimod) mediante la tecnología de secuenciación masiva Next Generation Sequencing (NGS) o RNA-seq. Se realizó un análisis de expresión diferencial de genes entre los respondedores y no-respondedores y una validación de los resultados mediante la técnica de qPCR. A partir del análisis de expresión diferencial entre respondedores y no respondedores, se seleccionaron tres genes relacionados con la EM: FOXP3, GPI y FCRL1. Con estos 3 genes y los porcentajes de las 2 poblaciones de citometría (NK bright y plasmablastos) se construyó un modelo probabilístico lineal que mide la probabilidad de que ocurra una adecuada respuesta al tratamiento. El modelo fue testado en los 30 pacientes restantes, realizando las determinaciones de expresión génica mediante qPCR y comparando la predicción del modelo con la respuesta clínica real. La sensibilidad y el valor predictivo positivo del modelo fueron del 85% mientras que la especificidad y el valor predictivo negativo fue del 95%. Este modelo se propone entonces como una herramienta de predicción que debería ser testada en una cohorte independiente con un mayor número de pacientes con el objetivo de ser aplicada en la práctica clínica habitual. Además del objetivo principal de esta tesis sobre la predicción de la respuesta a tratamiento también se describen algunos mecanismos sobre el efecto del fingolimod en las células inmunitarias humanas in vivo como el efecto en la disminución de la diferenciación de células B, el efecto inductor de genes antioxidantes, la potenciación de la inmunidad innata y la producción de factores del complemento.
