Resumen de Caracterización de la reacción de recombinación sitio específica catalizada por la relaxasa conjugativa trwc
La conjugación bacteriana es un proceso de transferencia lateral de ADN, por el cual ADN plasmídico es transferido de una bacteria donadora a una bacteria recipiente de una manera unidireccional. Este proceso de transferencia requiere de una maquinaria congujativa formada por una serie de proteínas y por una región específica de ADN e cis, denominada origen de transferencia, oriT, donde comienza y termina la transferencia de material génico. Este conjunto de proteínas y ADN se denomina relaxosoma. El componente proteico fundamental de la relaxosoma es la relaxasa, encargada de cortar el ADN de manera sitio-específica en un sitio de nic de corte de la molécula y de la posterior religación de los extremos libres formados, una vez estos son separados de la cadena. R388 es un plasmado conjugativo de amplio rango de huéspedes, aislado originalmente en cepas de E.coli denomina TrwC. TrwC es una proteína de 966 aminoácidos y 107, 5Kda.
En este trabajo hemos construido un sistema que nos permite estudiar la recombinación sitio específico entre dos secuencias oriT de una manera eficiente a dos velocidades. Recombinación de alta frecuencia se obtiene en presencia de la proteína catalítica TrwC y también de la proteína accesoria TrwA. Relaxasas conjugativas similares a TrwC de otros sistemas cercanos a R388 como son Tral de F y Tral de pKM101, no muestran esta misma capacidad recombinativa. hemos mapeado el dominio TrwC responsable de esta reacción mediante la construcción de una serie de mutantes puntuales y delecciones de la proteína. Mutaciones que incapacitan TrwC en su actividad de corte y transferencia de cadenas, también muestran un efecto negativo en la actividad recombinasa; sin embargo un mutante estable que retiene la actividad relaxasa de la proteína, N293, no es capaz de promover recombinación. Presentamos un nuevo dominio, TrwC N600, con correspondiente con el dominio de la relaxasa ni helicasa de TrwC que muestra una actividad recombi
