Resumen de Estudio de la prevalencia y transmisión de salmonella entérica subsp. Diarizonae serotipo 61: k:1,5, (7) en el ganado ovino y su implicación como agente etiológico de la rinitis crónica proliferativa. Estudios de campo e infección experimental en corderos

Luis Figueras Ara

• INTRODUCCIÓN Los gérmenes del género Salmonella tienen una distribución universal, estando presentes en múltiples localizaciones. Existen más de 2.500 serotipos de esta bacteria, de los cuales unos pocos son responsables de enfermedades, tanto en el ser humano como en los animales, alguna de ellas de elevada gravedad, produciendo importantes pérdidas económicas. Algunos de estos gérmenes están muy estudiados a nivel mundial, sin embargo, de otros serotipos se conoce menos dada su menor patogenicidad o repercusión económica.

  En los últimos años una nueva fuente de contagio de Salmonella para el hombre está tomando importancia. Varios serotipos pertenecientes al grupo IIIb de Salmonella se están aislando de personas con distintas afecciones, principalmente digestivas. Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) pertenece a este grupo IIIb. No obstante, la mayor parte de los serotipos de este grupo se aíslan con mayor frecuencia de reptiles. La aparición de distintos animales de estas especies, tortuga, iguanas, serpientes, etc. como animales de compañía está haciendo que varios serotipos, frecuentes en estas especies, causen distintos tipos de patologías en sus propietarios o en las personas que tienen contacto con éstas. Esto demuestra la capacidad de adaptación y zoonótica que poseen, también, los serotipos pertenecientes al grupo IIIb. Sin embargo, ninguna de las publicaciones consultadas respecto a los serotipos aislados en estas especies exóticas y en las personas afectadas de salmonelosis con este origen, describen el aislamiento de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7).

  Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) (SED*), germen perteneciente al grupo IIIb del género Salmonella, como se ha comentado, es citado en la bibliografía como un germen adaptado al ganado ovino, permaneciendo los animales de esta especie como portadores asintomáticos con prevalencia muy variable según países, zonas y estudios. Sin embargo, SED* también se ha asociado a varios procesos patológicos en el ganado ovino, uno de los cuales es la rinitis crónica proliferativa (RCP), objeto del presente estudio.

  La RCP es una enfermedad, de curso lento y progresivo, que afecta a los cornetes ventrales de las fosas nasales provocando una inflamación proliferativa, uni o bilateral, que acaba obstruyendo totalmente las vías respiratorias altas; terminando irremediablemente con la vida del animal. Durante los últimos años, nuestro equipo de trabajo ha observado un incremento en el aislamiento de este microorganismo en el ganado ovino, tanto en animales que presentaban el cuadro característico de la RCP como en animales asintomáticos.

  Con el fin de obtener un mayor conocimiento sobre la rinitis crónica proliferativa e intentar aportar información útil sobre su etiología y transmisión, así como tener datos iniciales en la prevalencia de la infección por Salmonella entérica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en el ganado ovino se plantearon varios estudios con los siguientes objetivos:

  • Confirmar la implicación de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) como agente etiológico de la rinitis crónica proliferativa.

  • Conocer y describir las lesiones macroscópicas e histopatológicas encontradas en los animales en los que se realizó la infección experimental con Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7).

  • Conocer la persistencia del microorganismo una vez colonizadas las vías respiratorias altas y valorar algunas vías de excreción del microorganismo.

  • Evaluar las posibles vías de transmisión, horizontal o vertical, de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en el ganado ovino, así como estudiar alguna de las posibles vías de eliminación de la bacteria, en animales asintomáticos.

  • Detectar la presencia de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en fosas nasales y heces de animales adultos asintomáticos, en varias ganaderías comerciales, con el fin de valorar la importancia de dicho germen en las explotaciones en las que se realizó el estudio.

  • Analizar algunos de los factores que puedan influir en la presencia de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en los rebaños del estudio.

  Palabras clave: Rinitis crónica proliferativa, Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7), infección experimental, vía de transmisión.

  DESARROLLO TEÓRICO.

  La revisión bibliográfica se ha dividido en varios apartados diferenciados para seguir de forma más clara y estructurada el desarrollo del trabajo.

  En primer lugar, se hace un breve recuerdo anatómico de las vías respiratorias altas del ganado ovino para tener un mejor conocimiento tanto de la localización de las lesiones de la rinitis crónica proliferativa como del punto exacto en donde se realizó la infección experimental.

  En un segundo apartado se realiza una descripción de la situación actual de las patologías que afectan a las vías respiratorias altas del ganado ovino, de forma más amplia y profunda en aquellas que se encuentran en las ganaderías de nuestro país. Se hace especial hincapié en aquellas enfermedades que, por su similitud en la sintomatología, son importantes para el diagnóstico diferencial con la RCP.

  Por último, se hace un repaso de la nomenclatura del género Salmonella, ya que, en los últimos años, dependiendo de las fuentes consultadas, ha existido cierta controversia. Dentro de este apartado, se hace también una revisión de la bibliografía existente sobre la rinitis crónica proliferativa y de la prevalencia de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) a nivel mundial, si bien, los datos existentes al respecto no son muy amplios.

  MATERIAL Y MÉTODOS.

  Este capítulo se ha dividido en varios apartados cada uno de los cuales corresponde a los distintos trabajos realizados para cada uno de los objetivos expuestos inicialmente.

  PRIMER ESTUDIO: INFECCIÓN EXPERIMENTAL.

  Este proyecto se desarrolló durante los años 2011 y 2012 en la Facultad de Veterinaria de Zaragoza, teniendo la aprobación de la Comisión Ética Asesora para la experimentación animal de la Universidad de Zaragoza.

  Para la infección experimental se utilizaron dos diferentes sistemáticas de inoculación, en función de las cuales se crearon dos subgrupos: • Un primer subgrupo, constituido por 6 animales, que recibió el inóculo mediante inyección intranasal directamente en el interior del cornete ventral. El punto de elección e inyección, en los 6 animales del grupo infectado que recibieron el inóculo y en el animal del grupo control que recibió el placebo por inyección intranasal directa, fue la incisura nasoincisiva, introduciendo la aguja aproximadamente 1,5 cm (Braun strerican 0,6x25mm 23G), penetrando directamente en el cornete ventral.

  • El segundo subgrupo, formado por 5 animales, recibieron el inóculo directamente por instilación nasal a través de los ollares, mediante jeringuilla estéril (Braun injekt 2 ml).

  Todos los animales recibieron 2 ml del preparado por punto de inoculación, independientemente de la sistemática de infección. En todos los animales se realizó la inoculación en ambos lados, el derecho y el izquierdo.

  El grupo control estuvo formado por cuatro animales. Tres de los animales no recibieron ningún tipo de inoculación, mientras que al animal restante se le inoculó, mediante inyección intranasal directa intranasal en el interior del cornete ventral, 2 ml del medio de suspensión un inoculado estéril como placebo.

  Desde el primer día post-infección, y durante todo el tiempo que duró el estudio, se realizaron inspecciones visuales diarias de todos los animales. Cuatro días después de la inoculación se hizo una exploración, y la primera toma de muestras, por separado, de ambas fosas nasales, vagina y heces de todos los animales, para realizar la primera valoración microbiológica de la infección experimental.

  Posteriormente se realizaron las mismas actuaciones, exploración y toma de muestras, una vez al mes, hasta el final del estudio un año después de la infección.

  Transcurridos seis meses desde la inoculación, se inició el estudio anatomopatológico, macroscópico, histológico e inmunohistoquímico, de los animales con la intención de comprobar la evolución de la infección y la posible presencia de lesiones. Tanto las necropsias como el estudio anatomopatológico, macroscópico e histológico, e inmunohistoquímico se realizaron en el Servicio de Anatomía Patológica de la Facultad de Veterinaria de Zaragoza.

  Los análisis microbiológicos de las muestras tomadas en las necropsias se realizaron igualmente en el Laboratorio Agroalimentario de la Diputación General de Aragón.

  SEGUNDO ESTUDIO: valoración de la presencia de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en ganaderías comerciales de Aragón.

  Este estudio se enmarcó dentro de un contrato de investigación y desarrollo firmado entre la Universidad de Zaragoza, a través de su Oficina de Transferencia de Resultados de Investigación (O.T.R.I.), y la empresa Gabinete Técnico Veterinario S.L. La duración de este proyecto fue desde junio de 2012 hasta enero de 2014, y se realizó en 10 granjas comerciales de ganado ovino de carne de Aragón.

  Para este proyecto se seleccionaron diez explotaciones comerciales de la Comunidad Autónoma de Aragón. En cinco de estas explotaciones se habían detectado animales con sintomatología de rinitis crónica proliferativa con anterioridad al estudio, habiéndose confirmado el proceso mediante estudio anatomopatológico y microbiológico. En las cinco ganaderías restantes nunca se había visto animales con sintomatología compatible con RCP.

  Para cada explotación, se realizaron cinco muestreos completos en los que se tomó muestras de fosas nasales y heces. Además, se realizaron dos muestreos adicionales en las explotaciones número 2 y 10, y otros cinco muestreos en la explotación número 5. En estos muestreos adicionales únicamente se tomaron muestras de las fosas nasales. En total se realizaron 59 muestreos, de los cuales se obtuvieron y analizaron un total de 472 muestras de fosas nasales y 200 muestras de heces. Si bien el número total de muestras de fosas nasales ascendió a 472, no se tuvo en cuenta el lado del que se había tomado la muestra para considerar a un animal como positivo, estableciendo como animal positivo aquel que tuvo un aislamiento positivo en cualquiera de los lados muestreados o si lo fue en ambos simultáneamente. Por este motivo el valor máximo del dato de muestras de fosas nasales estudiadas es de 236. De estos muestreos, 50 de ellos fueron completos, fosas nasales y heces, en los cuatro animales de todas las explotaciones.

  Todas las muestras fueron remitidas, para realizar los análisis microbiológicos, al Laboratorio Agroalimentario del Gobierno de Aragón, donde se realizaron los cultivos e identificación del germen.

  TERCER ESTUDIO: aislamiento de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en corderos nacidos de madres libres y portadoras del germen.

  Este estudio se enmarcó dentro de un contrato de investigación y desarrollo firmado entre la Universidad de Zaragoza, a través de su Oficina de Transferencia de Resultados de Investigación (O.T.R.I.), y las empresas Gabinete Técnico Veterinario S.L. y Hermanos Millán Arnaldos S.C.

  Para este e3studio se seleccionaron 35 animales, identificándose en dos lotes. Uno formado por 21 ovejas positivas a SED* en ambas localizaciones simultáneamente, fosas nasales y heces (dobles positivas). El otro estuvo formado por 14 ovejas, pero éstas con ambos aislamientos negativos (dobles negativas).

  Conforme se fueron produciendo los partos de las 35 ovejas seleccionadas se iban tomando muestras de los corderos nacidos de las mismas, igualmente de fosas nasales y heces. La metodología empleada en los corderos fue idéntica a la realizada en las ovejas Los muestreos de los corderos se realizaron en tres momentos diferentes de la crianza de los mismos, siendo la metodología empleada la misma para los tres momentos:

  1. Primera semana de vida.

  2. Al mes de edad.

  3. A los dos meses de edad.

  Debido a que los partos no se produjeron de forma sincronizada, se realizó una visita semanal hasta que se produjeron todos los partos de las ovejas seleccionadas. El último parto de estas ovejas tuvo lugar a las tres semanas después del primer parto e inicio de los muestreos. Como consecuencia de esto, los nacimientos, y por tanto los corderos, se agruparon en tres lotes, uno por semana. Por este motivo, la edad mínima de los corderos en la primera toma de muestras osciló entre un día de vida, si nacía el día de la visita, y seis días de vida. Esta distribución de los corderos por lotes en función de su fecha de nacimiento, supuso que las otras dos tomas de muestreas también se repartieran en tres semanas consecutivas, para cumplir con el protocolo establecido.

  Todas las muestras obtenidas, tanto de corderos como de ovejas, fueron remitidas en refrigeración, antes de las 24 horas post-muestreo, al Laboratorio Agroalimentario del Gobierno de Aragón para realizar los análisis microbiológicos.

  RESULTADOS.

  PRIMER ESTUDIO: INFECCIÓN EXPERIMENTAL.

  Al analizar los aislamientos microbiológicos de las primeras muestras, tomadas cuatro días post-infección, se obtuvo que el 100% de los animales infectados, independientemente del método de inoculación utilizado, tuvieron, en al menos una de las dos muestras de fosas nasales, aislamiento positivo de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) (p=0,001). En este momento, en las otras dos localizaciones analizadas en este ensayo los aislamientos fueron menores. Así, se obtuvieron dos aislamientos positivos en la muestra de heces de dos animales (20,00%), mientras que tan solo uno fue positivo en la muestra de vagina (10,00%).

  El análisis de los aislamientos microbiológicos de ambas fosas nasales en conjunto durante el período comprendido entre la tercera y la séptima toma de muestras, dio como resultado que el 100% de los animales del grupo infectado tuvo aislamiento positivo de SED*. En los muestreos posteriores el porcentaje de aislamientos fue descendiendo progresivamente y así, en la octava toma de muestras los aislamientos fueron positivos en 5 de las 6 muestras (83,30%), descendiendo en la siguiente al 75,00%. Aún así, desde este momento hasta el final del estudio, el 50,00% de los animales presentes tuvieron aislamiento positivo de SED* en fosas nasales.

  Después de la primera toma de muestras, los aislamientos en las muestras de vagina fueron negativos en todas las tomas excepto para el octavo muestreo, 25 de junio de 2012, en el que un animal presentó aislamiento positivo de SED*. Los aislamientos de SED* en vagina fueron los menos numerosos a lo largo del estudio. De esta forma, sólo 3 animales presentaron aislamiento positivo en dos momentos puntuales del estudio, perteneciendo dos animales al subgrupo infectado por inyección y uno del subgrupo infectado por instilación.

  Los aislamientos de SED* en las muestras de heces fueron más variables. En la primera y segunda toma de muestras sólo dos animales presentaron aislamiento positivo. En la tercera toma el 50,00% de los animales del grupo infectado fueron positivos. El máximo número de aislamientos positivos sucedió en el sexto muestreo, 16 de abril de 2012, en el que seis de los animales infectados (60,00%) presentaron aislamiento positivo (p=0,085). El mayor porcentaje de animales positivos se obtuvo el día 23 de julio de 2012, cuando el 75,00% de los animales del grupo infectado resultaron positivos, si bien el número de animales del lote era reducido (3/4).

  Los resultados de los análisis microbiológicos indicaron que ambas vías fueron igual de eficaces a la hora de instaurar la infección puesto que el 100% de los animales infectados eliminaron SED* por alguna de las localizaciones muestreadas, al menos una vez durante el tiempo que duró el estudio. Al analizar la localización de estos aislamientos se vio que el 100% de los animales resultó positivo en fosas nasales. Sin embargo, cuando se analizaron los cultivos de las muestras de heces se observó que en tres de los cinco animales infectados por inyección intranasal directa (60,00%) presentaron aislamientos positivos; mientras que, en el caso de los animales infectados por instilación nasal el 100% de estos tuvo alguna muestra positiva en heces. Respecto al análisis de los aislamientos de SED* en vagina entre los dos grupos de infección no hubo diferencias, ya que un animal de cada subgrupo, inyección e instilación, presentó aislamiento positivo.

  A pesar de haber conseguido reproducir la infección por Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en todos los animales, libres del germen, del grupo infectado, y evidenciar la presencia de SED* durante el año que duro el estudio, el estudio anatomopatológico completo no consiguió evidenciar las lesiones características de la RCP. El estudio inmunohistoquímico tampoco puso de manifiesto en comportamiento intracelular de SED*, como ocurre en los animales que presentan el cuadro típico de RCP.

  SEGUNDO ESTUDIO: valoración de la presencia de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en ganaderías comerciales de Aragón.

  El 90,00% de las explotaciones muestreadas tuvieron el menos un aislamiento positivo en algún momento del estudio. Solamente la explotación número 8, no presentó, en ningún momento, aislamiento de la bacteria en la que se centra el estudio, aunque sí que se encontraron otros aislamientos de Salmonella spp.

  Del total de muestreos realizados, el 18,64% (11/59) resultaron negativos, mientras que en el 81,36% (48/59) de los muestreos hubo al menos un animal positivo, tal y como se muestra en la gráfica 10. El 100,00% de los muestreos positivos lo fue en la localización de fosas nasales, mientras que el 47,46% de los mismos lo fueron en la localización de heces y fosas nasales simultáneamente, lo que supuso un 71,00% más de muestreos positivos en fosas nasales respecto a las heces.

  El mayor número de aislamientos positivos en los 59 muestreos, independientemente de la localización del aislamiento positivo, fosas nasales o en heces, se obtuvo en otoño, mientras que en invierno es cuando menos muestreos negativos se obtuvieron. Sin embargo, la proporción de muestreos positivos, en relación con el número de muestreos realizados en cada época, indicó que es en invierno cuando aparece el mayor número de positivos con un 87,50% de positivos, seguido del verano, con el 84,61%, y de la primavera con el 81,25%.

  Además, se realizó el análisis de los resultados de los muestreos respecto a los cuatro grupos de edad establecidos. Independientemente de la edad de los animales se observó la presencia de SED* prácticamente en la mitad de los muestreos analizados, este porcentaje fue ligeramente superior para el grupo cuya edad estaba comprendida entre 2 y 4 años (52,00% vs 42,00%), si bien no se apreciaron diferencias significativas entre los diferentes grupos. Igualmente, en todos los grupos de edades se observó un mayor porcentaje de muestreos positivos para la localización de las fosas nasales, tanto de animales dobles positivos como solo en las muestras de fosas nasales. Los porcentajes de muestreos positivos en esta localización, y para los que lo fueron en las dos localizaciones simultáneamente, fueron muy similares, independientemente del rango de edad analizado. No obstante, a pesar de esta similitud, se apreció que el número de muestreos positivos exclusivamente en fosas nasales fue mayor para los grupos de edades comprendidas entre 2 y 4 años y para el de ovejas mayores de seis años. Por otro lado, el grupo de ovejas de 2-4 años fue el que mayor porcentaje de muestreos positivos totales tuvo en la localización de las fosas nasales (48,00%), seguido del grupo de más de 6 años con un 44,00%. Mientras que los grupos de 0-2 años y 4-6 años presentaron un 36,00% y 34,00% de muestreos positivos, respectivamente. En todos los grupos de edad la probabilidad de encontrar SED* en las muestras de fosas nasales fue mayor, y estadísticamente significativa, que el hacerlo en las muestras de heces (p<0.05). La presencia del germen en heces estuvo asociada a la presentación del mismo en fosas nasales en todos los grupos de edad excepto para el de los animales mayores de 6 años. Esta asociación provocó un riesgo 12, 7 y 8 veces mayor de aislar SED* en heces si el germen estaba presente en fosas nasales para los grupos de edades de 0-2, 2-4 y 4-6 respectivamente.

  De los 200 animales analizados en las dos localizaciones 33 de ellos fueron positivos en ambas simultáneamente (16,50%), mientras que 12 animales (6,00%) fueron positivos en la muestra de heces y 44 (22,00%) lo fueron exclusivamente en la muestra de fosas nasales (Gráfica 18). En total, el 38,50% de los 200 animales analizados tuvieron aislamiento positivo en la muestra de fosas nasales, lo que supone un 71,00% más de aislamiento que en heces.

  cuando se analizaron los resultados de los animales positivos en heces, a pesar de ser semejantes los resultados del estudio de ambas zonas en conjunto, y presentarse la mayor proporción de muestras positivas en verano, al igual que para fosas nasales, se obtuvo una importante reducción en la proporción de muestras positivas durante el otoño, resultando la misma estadísticamente significativa (p <0,05); lo que estableció un riesgo de 2,882, 2,597 y 3,774 veces más de encontrar SED* en las muestras de heces durante el invierno, primavera y verano respectivamente, respecto a la posibilidad de asilar el germen durante el otoño.

  Cuando se analizó la presencia de SED*en las explotaciones se vio que, a excepción de la explotación número 8, todas tuvieron algún muestreo positivo, independientemente del número de muestras positivas y de las localizaciones de las mismas. Además, todas las explotaciones positivas presentaron aislamientos en ambas localizaciones, fosas nasales y heces, a excepción de la explotación número 3 que solo presentó aislamientos positivos en las muestras de fosas nasales y, además, en menor proporción (4/20) que las otras ocho explotaciones positivas del estudio. Todas las explotaciones, a excepción de la explotación número 1, presentaron un mayor porcentaje de aislamientos en las fosas nasales. La explotación número 1, que presentó mayor número de aislamientos en heces, es la que mayor número de aislamientos positivos tuvo (22/40), siendo 9 positivos en fosas nasales y 13 en las muestras de heces, resultando positivos 14 animales de los 20 muestreados (70,00%). La segunda explotación con más aislamientos positivos totales, explotación número 6, presentó la mayoría de los aislamientos en fosas nasales (14/40), al igual que el resto de ganaderías positivas, aunque en menor proporción. En casi todas las explotaciones positivas, los aislamientos obtenidos en los grupos de edades de los rangos más jóvenes, 0-2 y 2-4 años, suponen más del 50,00% de los aislamientos. Únicamente la explotación 10 tuvo el mayor número de aislamientos en el grupo de ovejas de 4-6 años. El resto de explotaciones tuvieron un número de aislamientos positivos y porcentaje de aislamientos en los grupos de edades similares.

  TERCER ESTUDIO: aislamiento de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en corderos nacidos de madres libres y portadoras del germen.

  En los resultados microbiológicos de la primera toma de muestras realizada a los corderos, en su primera semana de vida, se obtuvo que 14 corderos de los 53 nacidos (26,40%) fueron positivos en alguna de las localizaciones muestreadas, bien fosas nasales o bien heces. El 11,30% del total de corderos analizados (6/53) fueron positivos en la muestra de fosas nasales, lo que supuso el 42,80% (6/14) de los corderos positivos. Para las analíticas de las muestras de heces, el 15,10% sobre el total de corderos analizados (8/53) tuvieron un aislamiento positivo, lo que correspondió al 57,20% (8/14) de los positivos en el estudio. Ningún cordero fue positivo en las dos localizaciones simultáneamente. De estos 14 corderos positivos, 8 de ellos (57,20%) nacieron de madres negativas en el muestreo inicial; de los cuales 5 (62,50%) fueron positivos en la muestra de fosas nasales y 3 (37,50%) lo fueron en la de heces. Los 39 corderos restantes (73,60%) fueron negativos.

  En la segunda toma de muestras, realizada un mes después, todos los corderos resultaron negativos, tanto en fosas nasales como en heces. En la tercera toma de muestras, realizada cuando los corderos tenían aproximadamente dos meses de vida, solamente un cordero fue positivo en heces (1,88%).

  Al analizar los aislamientos positivos en fosas nasales resultó que un cordero dio positivo en las primeras 24 horas de vida. Otros tres corderos tuvieron resultado positivo cuando tenían tres, seis y siete días. El mayor número de corderos positivos tuvo lugar cuando el muestreo se hizo a los corderos que tenían cuatro días de vida, en este momento dieron positivo dos corderos. El mayor número de aislamientos en fosas nasales se presentó a partir del tercer día de vida de los corderos.

  Cuando lo que se analizaron fueron los aislamientos positivos en las muestras de heces se observó que todos los aislamientos se obtuvieron de animales con menos de cuatro días de vida, obteniéndose el mayor número de aislamientos en los corderos de dos días de vida (3/8). Dos corderos resultaron positivos con un día de edad y otros dos cuando tenían cuatro. El cordero restante fue positivo con tres días de edad. En esta localización no hubo aislamientos ni para los corderos de menos de 24 horas de vida ni para los mayores de cuatro días.

  Finalmente, se valoró el cambio de estatus de las ovejas que al inicio del estudio eran negativas y que a lo largo del mismo fueron positivas en alguna de las localizaciones analizadas, así como las posibles consecuencias de este cambio sobre los resultados de los aislamientos en sus corderos. Como se ha comentado una oveja falleció durante el estudio, siendo eliminada del mismo al no tener más que el muestreo inicial. Este hecho hizo que el grupo de madres negativas, inicialmente formado por 14 animales, estuviera formado por 13 animales para este estudio, tal y como se muestra en la figura 35. En el segundo muestreo, (T2) realizado un mes después, el 46,00% (6/13) resultó positivo en alguna de las localizaciones analizadas. En el tercer muestreo (T3), una oveja de las positivas en el muestreo anterior tuvo aislamiento positivo, mientras que las cinco restantes tuvieron aislamiento negativo. Por otra parte, en este mismo muestreo, cinco animales de los que tuvieron aislamiento negativo en el muestreo anterior, fueron positivos en alguna de las localizaciones analizadas en esta ocasión. Con este estudio se determinó que los animales muestreados no repiten resultado consecutivo entre dos muestreos y, por lo tanto, no se observa una asociación entre la probabilidad de obtener un cultivo de SED* en dos muestreos consecutivos (p>0,05).

  CONCLUSIONES.

  1. La infección experimental con Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7), en corderas de tres meses de edad y libres del patógeno, ha resultado eficaz tanto por inyección intranasal como por instilación. El germen se ha aislado en los animales del grupo infectado a partir de muestras de heces y de las muestras tomadas con hisopo en fosas nasales y vagina durante todo el tiempo que duró el estudio, si bien la excreción de la bacteria fue intermitente.

  2. Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7), una vez colonizado el tracto respiratorio, se localiza principalmente en el aparato digestivo, en los nódulos linfáticos mandibulares y parotídeos y, en menor medida, en el aparato reproductor, quedando los animales como portadores asintomáticos.

  3. Las principales vías de eliminación tras la infección experimental por Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) han sido la vía respiratoria y la digestiva, siendo la vía reproductiva poco relevante enguanto a la excreción de la bacteria.

  4. Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) es un microorganismo bien adaptado al aparato respiratorio del ganado ovino, pudiendo aislarse en muestras de fosas nasales y cornetes nasales ventrales de los animales del grupo infectado al menos durante un año. Sin embargo, no ha sido posible reproducir las lesiones de la rinitis crónica proliferativa mediante la infección experimental con dicha bacteria.

  5. Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) es una bacteria endémica en los rebaños de ganado ovino muestreados, aislándose en el 90,00% de las explotaciones muestreadas. La presencia del germen dentro de los rebaños estudiados fue muy variable oscilando los aislamientos entre el 0,00% y el 80,00% de los animales del rebaño. Los aislamientos positivos en las muestras de fosas nasales y de heces son más elevados en animales adultos que en corderos de menos de tres meses.

  6. El aislamiento de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7), en fosas nasales y heces, no muestra excesivas variaciones a lo largo del año en los rebaños en los que está presente, si bien durante el otoño se ha observado una reducción significativa de la excreción de la bacteria por la vía digestiva.

  7. La excreción de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) a través de fosas nasales y heces ha resultado discontinua en todos los animales adultos asintomáticos analizados.

  8. El nivel de excreción de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en las ovejas en el momento del parto es un factor a tener en cuenta en la transmisión de la bacteria a los corderos recién nacidos. Las ovejas del estudio mostraron una excreción discontinua desde un mes antes del parto hasta dos meses después del mismo. Los corderos nacidos de las ovejas con aislamientos positivos mostraron aislamientos positivos en fosas nasales, y más frecuentemente en heces, ya en su primera semana de vida, siendo esta excreción también intermitente a lo largo del tiempo. Los corderos nacidos de ovejas negativas se mantuvieron negativos todo el tiempo que duró el estudio.

  9. La presencia de animales con rinitis crónica proliferativa en los rebaños implica una mayor probabilidad de obtener aislamientos positivos de Salmonella enterica subsp. diarizonae serotipo 61:k:1,5,(7) en las muestras de fosas nasales o en las de heces en los animales asintomáticos presentes en dichos rebaños.

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