Aislamiento y caracterización de 5'-nucleotidasa de células bcs-tc2. Estudios de diferenciación celular

• Autores: J.M. Navarro Llorens
• Directores de la Tesis: María Antonia Lizarbe Iracheta (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 1996
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Jose Gregorio Gavilanes Franco (presid.), Alicia Megías (secret.), María Teresa Miras Portugal (voc.), Patricio Aller Tresguerres (voc.), María Julia Araceli Buján Varela (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
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• Resumen

  • La ectoenzima 5'-nucleotidasa se ha aislado y purificaco a homogeneidad de células rugli y bcs-tc2. La masa molecular del monomero es de 74 kda aproximadamente. Entre las principales características de estas enzimas destacan el alto contenido en manosa, su carácter de metaloenzima y el no requerimiento de la presencia de un cation divalente para que la enzima sea activa. Aunque la 5'-nucleotidasa es liberada de la membrana plasmática después del tratamiento con fosfolipasa c especifica de fosfatidil inositol en ambas líneas celulares, los porcentajes de enzima que se libera difiere según se trate de las células rugli o bcs-tc2. Asi, se consigue liberar casi la totalidad de la 5'-nucleotidasa de la membrana plasmática de las células rugli, lo que indica que esta enzima se encuentra anclada via gpi. Sin embargo, solo se libera la mitad de la enzima en las células bcs-tc2, lo que indicaría la presencia de posibles isoformas para la 5'-nucleotidasa. El aislamiento y caracterización de estas en las células bcs-tc2, no proporciona diferencias enzimáticas apreciables, por lo que podria tratarse de modificaciones en el grupo gpi o en el tipo de anclaje. La actividad 5'-nucleotidasa obtenida en ausencia de detergentes, permite establecer una forma dimerica para esta enzima en la que los monomeros no se encuentran unidos por puentes disulfuro a diferencia de lo propuesto para otras 5'- nucleotidasas. Los cambios morfológicos observados, la menor proliferación celular junto a la presencia de apoptosis, el incremento en los niveles de cea y fosfatasa alcalina, marcadores de diferenciación, permiten comprobar que las células bcs-tc2 se han diferenciado después del tratamiento con butirato sódico. La 5'-nucleotidasa se incrementa durante el proceso de diferenciación de las células bcs-tc2 creciendo en fase exponencial, al igual que ocurre con la galectina-1, por lo que podrían considerarse marcadores de este proceso. Otras proteinas,