Inducción a la puesta en lubina europea (dicentrarchus labrax l.) Mediante el uso de sistemas de liberación sostenida y nuevos análogos de gnrh
- Autores: Mª Asunción Forniés Duerto
- Directores de la Tesis: Silvia Zanuy (dir. tes.), Gonzalo Martínez-Rodríguez (codir. tes.), Ana González (tut. tes.)
- Lectura: En la Universitat de València ( España ) en 2009
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Manuel Carrillo Estévez (presid.), Nuria Paricio (secret.), Juan Francisco Asturiano Nemesio (voc.), Luz María Pérez Igualada (voc.), Francisco Prat Baella (voc.)
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: TESEO
- Resumen
La inducción a la puesta y especialmente su sincronización es muy importante en la producción industrial de lubina y para realizarla se inyecta a las hembras reproductoras con análogos de GnRH. El estudio realizado durante la presente tesis doctoral tenía como objetivo estudiar, tanto in vivo como in vitro, el efecto del tratamiento con formas nativas y análogos estructurales de la GnRH, sobre la secreción y liberación de gonadotrofinas hipofisarias de la lubina europea (Dicentrarchus labrax). Esta especie tiene tres formas de GnRH: salmón (sGnRH), pollo (cGnRH-II) y dorada (sbGnRH). sbGnRH es la forma hipofisiotropa. Sin embargo cGnRH-II es la más potente en la liberación de hormona luteinizante (LH). Se han estudiado nuevos análogos de las GnRHs, así como nuevos sistemas de liberación de GnRH que mantienen niveles elevados de LH durante 3-6 semanas, y que son muy efectivos en especies relacionadas y en machos de lubina.
Este estudio se centró, tanto en el conocimiento básico del eje endocrino como en la aplicación práctica de nuevos métodos de sincronización de la puesta de los reproductores de esta especie en cautividad. Para ello se plantearon dos tipos de experimentos, a fin de evaluar la potencia de los nuevos análogos de GnRH sobre la secreción de LH, y la efectividad de sistemas de liberación sostenida de GnRH. Los análogos se evaluaron tanto in vitro como in vivo, y respecto a los sistemas de liberación, se estudió la calidad de los huevos producidos por un lado, y por otro el eje hormonal.
Para las experiencias in vitro se trataron cultivos de células de pituitaria de lubina con las GnRHs, y sus análogos. Se optimizó el cultivo y se estudió la dosis-respuesta de cada hormona. Se obtuvo un incremento sigmoidal en la cantidad de LH liberada, proporcional al logaritmo de la dosis de hormona aplicada. Se identificó la presencia de células gonadotropas en el cultivo mediante técnicas inmunocitoquímicas. Para facilitar la comparación se calculó, partiendo de la regresión, la dosis a la que cada forma libera la mitad de la LH total (EC50). El orden final de actividad resultó ser [D-Arg6 Pro9 NEt]-cGnRH-II > [D-Ala6 Pro9 NEt]-cGnRH-II > sGnRH > LHRHa ([D-Ala6 Pro9 NEt]-mGnRH) > [D-Trp6 Pro9 NEt]-sbGnRH > [D-Ala6 Pro9 NEt]-sbGnRH > cGnRH-II > sbGnRH.
Para las experiencias in vivo, tras la selección de hembras mantenidas en cautividad en estado de pre-puesta, se les administró una inyección intraperitoneal a una dosis única. Se les extrajo sangre y se analizó la LH circulante. El orden final de actividad resultó ser [D-Ala6, Pro9 Net]-mGnRHa > [D-Arg6, Pro9 Net]-cGnRH-IIa > [D-Ala6, Pro9Net]-cGnRH-IIa > [D-Ala6, Pro9Net]-sbGnRHa > [D-Trp6, Pro9 Net]-sbGnRHa > cGnRH-II > sbGnRH Para el experimento relativo al estudio de la calidad de los huevos producidos, se eligieron los animales y se trataron con dos sistemas de liberación diferentes, EVAc y microesferas biodegradables que liberan GnRH a lo largo de varias semanas, y con fines comparativos, una inyección. Se recogieron los huevos y se determinó su cantidad y calidad. Un método de liberación sostenida resultó muy fructífero en cuanto a cantidad pero negativo en cuanto a calidad de la puesta mientras que el otro aumentó de forma más moderada la cantidad de huevos producidos pero sin merma de su calidad.
En el caso del experimento diseñado para el estudio del eje hormonal, se seleccionaron los animales y se estudió solamente las microesferas en contraposición a la inyección. Periódicamente se tomaron muestras de sangre para analizar los cambios hormonales del eje cerebro-hipófisis-gónadas. Se determinaron los niveles plasmáticos de LH, los esteroides sexuales (estradiol y testosterona) y el esteroide inductor de maduración 17alfa,20beta-P, en las hembras tratadas con ambos sistemas.
Con todos los resultados se han conseguido los objetivos fundamentales del trabajo, profundizando en la endocrinología reproductiva de esta especie y en los métodos usados para la inducción a la puesta a nivel comercial.
