Polisacáridos en aceitunas de las variedades “manzanilla” y “gordal”: aislamiento y purificación
- Autores: Antonio Miguel Gil Serrano
- Directores de la Tesis: Manuel Gómez Guillén (dir. tes.), José Manuel Fernández Bolaños Vázquez (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Sevilla ( España ) en 1981
- Idioma: español
- Número de páginas: 263
- Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Pereda Marín (presid.), José Fuentes Mota (secret.), Manuel Gómez Guillén (voc.), José Manuel Fernández Bolaños Vázquez (voc.), Felipe Alcudia González (voc.)
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- Tesis en acceso abierto en: Idus
- Resumen
El objeto de este trabajo es el aislamiento y purificación de los polisacáridos que existen en las aceitunas verdes deshuesadas de las variedades “manzanilla” y “global”.
Una revisión bibliográfica sobre la química y bioquímica de los hidratos de carbono en la aceituna, pone de manifiesto el papel fundamental que estos compuestos desempeñan en la biogénesis del aceite de oliva, en el aspecto y conservación del fruto y en los procesos fermentativos. De esta revisión se deduce lo limitado que es aún el conocimiento sobre la naturaleza y composición de los hidratos de carbono en este fruto.
Los trabajos que hasta ahora se han realizado sobre los polisacáridos en aceitunas, se limitan a determinaciones globales de ellos. Corrao determina el contenido en pectina de la pasta de aceituna. Luh y colb., relacionan los cambios en el contenido total de pectinas con la textura de la aceituna. Fernández Díez y colb., determinan el contenido de pectinas en aceitunas verdes, la variación de la composición péctica durante su elaboración y la relación entre las enzimas pectinolíticas con el ablandamiento de los productos del aderezo. Últimamente A. Heredia y M. Fernández-Díez analizan el contenido de celulosa, lignina y fibra en aceitunas verdes y aderezadas de distintas variedades.
Sin embargo no se han realizado estudios estructurales, desconociéndose la naturaleza de las hemicelulosas, pectinas o sustancias relacionadas en aceitunas verdes. Solamente Ragazzi y colb., investigando los componentes solubles en el agua de vegetación (alpechín) aíslan un polisacárido complejo formado por galactosa, arabinosa, xilosa, ramnosa y ácido galacturónico, además de un pigmento constituido por macromoléculas de catecol-melaninas enlazadas con azúcares.
Esta memoria se ha estructurado en siete capítulos. El primero corresponde a la introducción. En el segundo se estudia la naturaleza, composición y nomenclatura de los polisacáridos en los tejidos vegetales y se hace una revisión de los métodos de aislamiento y purificación que se emplean en la química de estos compuestos.
En los capítulos tercero y cuarto, se estudian los polisacáridos que se extraen con agua y con soluciones alcalinas de la pulpa de aceitunas deshuesadas de la variedad “manzanilla”. El capítulo tercero comprende varios apartados, donde se describen el aislamiento de una arabinogalactana, su purificación por cromatografía sobre geles porosos y el análisis cualitativo y cuantitativo por cromatografía gas-líquido de los monosacáridos y ácido galacturónico que la constituyen. Se estudia su homogeneidad y se determina su peso molecular medio por cromatografía sobre gel. El capítulo cuarto comprende también varios apartados. En los primeros, se describe el aislamiento de una arabinogalactana y de hemicelulosas A y B con estructuras de xiloglucana y galactoglucomanana con ramificaciones de arabinosa y xilosa respectivamente. En otros apartados de este mismo capítulo se inicia el estudio de las estructuras de estas hemicelulosas mediante hidrólisis parcial, distribución de los pesos moleculares en función del tiempo de hidrólisis y acetolisis.
En los capítulos quinto y sexto se estudia el aislamiento, purificación y composición de una arabinogalactana, una galactoglucomanana y una galactoglucana, que se extraen con agua y con soluciones alcalinas de la pulpa de aceitunas deshuesadas de la variedad “gordal”.
Por último, en el capítulo séptimo se detallan las conclusiones.
CONCLUSIONES 1. Se aisla y purifica un material hemicelulósico soluble en agua de la pulpa de aceitunas deshuesadas de la variedad “manzanilla”, que previamente se ha extraído con etanol del 80% y con disolventes orgánicos (hexano y cloroformo-metanol). El contenido en monosacáridos es del 30% y en ácido galatacturónico del 10%. El porcentaje de los monosacáridos es el siguientes: Ramnosa, 5,8; arabinosa, 56,5; xilosa, 3,6; manosa, 2,1; galactosa, 25,8 y glucosa, 6,1. El peso molecular medio determinado por cromatografía de filtración sobre Sephacryl S-300 es de 45000. Se le asigna por su composición una estructura de arabinogalactana.
2. Se aisla una hemicelulosa B de la pulpa de aceitunas deshuesadas de la variedad “manzanilla”, que previamente se ha extraído con etanol del 80%, hexano, agua y KOH al 10% y precipita con etanol del 80%. El contenido en monosacáridos de una de las fracciones purificadas es del 52% y su porcentaje es el siguiente: Ramnosa, 6,4; arabinosa, 46,6; xilosa, 19,7; galactosa, 14,8 y glucosa, 12,6.
3. Se aisla una hemicelulosa A de la pulpa de aceitunas deshuesadas de la variedad “manzanilla”, que previamente se ha extraído con etanol del 80%, cloroformo-metanol y se ha deslignificado con NaOH al 1% en etanol del 80%. Esta hemicelulosa se extrae con NaOH al 10% y precipita al acidificar con ácido acético. Está compuesta de glucosa (85%) y de xilosa. En la acetolisis se aisla celobiosa y se identifica su serie homóloga hasta un grado de polimerización de cinco unidades. Se le asigna la estructura de una glucana con enlaces β (1→4) y posibles ramificaciones de xilosa.
4. Se aisla una hemicelulosa B de la pulpa de aceitunas deshuesadas de la variedad “manzanilla”, preparada como se ha indicado en el apartado anterior. Esta hemicelulosa se extrae con NaOH al 10% y precipita con etanol cuando se alcanza una concentración del 80%. Tiene un contenido total de monosacáridos del 73,5% con el siguiente porcentaje: Arabinosa, 6,5; xilosa, 62,3; galactosa, 2,2 y glucosa, 29,0. Por su composición se le asigna la estructura de una glucoxilana.
5. Se aisla una hemicelulosa B de la pulpa de aceitunas deshuesadas de la variedad “manzanilla”, que previamente se ha extraído con etanol del 80%, con cloroformo-metanol, con agua y se ha sometido a un tratamiento con metilato sódico. Esta hemicelulosa se extrae con NaOH al 10% y precipita formando un complejo de cobre con licor de Fehling. El contenido en monosacáridos es del 65% y su porcentaje el siguiente: Arabinosa, 7,7; xilosa, 15,1; manosa, 17,8; galactosa, 13,6 y glucosa, 49,9. En la acetolisis se aíslan celobiosa y un disacárido de glucosa y manosa. Su peso molecular medio, determinado por cromatografía de filtración sobre Sephacryl S-300, es de 53000. Por su composición y el comportamiento en las hidrólisis parciales se le puede asignar la estructura de una galactomanoglucona con ramificaciones de xilosa y arabinosa.
6. Se aisla un material hemicelulósico soluble en agua de la pulpa de aceitunas deshuesadas de la variedad “global”, que previamente se ha extraído con etanol del 80% y con disolvente orgánico (hexano y acetona). El contenido en monosacáridos es del 9,2% y en ácidos urónicos del 4,4%. El porcentaje de los monosacáridos es: Ramnosa, 9,6; arabinosa, 65,7; xilosa, 5,7 y galactosa, 18,8. El peso molecular determinado por filtración sobre Sephacryl S-300 es de 73000. Por su composición se le asigna la estructura de una arabinogalactana, análoga a la obtenida en la variedad “manzanilla”.
7. Se aisla una hemicelulosa B de la pulpa de aceitunas deshuesadas de la variedad “gordal”, que previamente se ha extraído con etanol del 80%, disolventes orgánicos, agua y después de tratada con metóxido sódico, extraída de nuevo con agua. La hemicelulosa B se extrae con NaOH al 10% y se precipita con etanol del 80%. Esta hemicelulosa se purifica por tratamiento con el licor de Fehling, asilándose una fracción que forma un complejo insoluble con las sales de Cu(II) y otra que no forma complejo insoluble con las sales de Cu(II).
La primera fracción tiene un contenido en monosacáridos del 95,3% y presenta el siguiente porcentaje: Arabinosa, 5,6; xilosa, 18,8; manosa, 23,4; galactosa, 16,9 y glucosa, 35,4. El peso molecular determinado por filtración sobre Sephacryl S-300 es de 420000.
La fracción que no forma complejo insoluble con las sales de Cu(II) tiene un contenido en monosacáridos del 66,7% con la siguiente composición: Ramnosa, 3,6; arabinosa, 19,0; xilosa, 32,9; galactosa, 21,0 y glucosa, 23,0. El peso molecular medio determinado por filtración sobre Sephacryl S-300 es de 80000.
