Implicación de un citocromo c en la biosíntesis de la nitrato reductasa respiratoria de thermus thermophilus

• Autores: Olga Zafra Amorós
• Directores de la Tesis: José Berenguer Carlos (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2004
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Francisca María Fernandez (presid.), José Antonio López Guerrero (secret.), Conrado Moreno Vivián (voc.), Juan Alfonso Ayala Serrano (voc.), Eduardo Díaz Fernández (voc.)
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• Resumen

  • T. thermophilus HB8 puede crecer anaeróbicamente con nitrato, gracias a la presencia de una nitrato reductasa respiratoria unida a membrana (Nar).

    En otros microorganismos esta enzima se compone de tres subunidades (NarG, NarH y NarI) codificadas en un operón junto a otro gen para una chaperona específica del sistema (NarJ). En T. thermophilus HB8, un nuevo gen, narC, se encuentra antes de narG. El principal objetivo de este trabajo es estudiar el papel de NarC en la estructura, síntesis y maduración de la nitrato reductasa termófila.

    En primer lugar se analiza la transcripción del gen narC y se concluye que se contranscribe con las subunidades estructurales de la nitrato reductasa. Además, se identifica el inicio de la transcripción del promotor nar, a unos 91 pb desde el ATG de narC.

    Después se aislaron mutantes de inserción narC::kat para obtener información sobre su naturaleza y función. Los datos muestran que NarC es un citocromo c anclado a membrana, de unos 27 kDa, cuya presencia es estrictamente necesaria para el crecimiento anaeróbico. Además, se necesita para el anclaje a la membrana de la subunidad catalitica, NarG. En E. Coli, este anclaje depende únicamente de Narl, por lo que se añadieron al estudio mutantes narl::kat de T. Thermophilus, encontrando que el fenotipo era semejante. Por tanto se concluye que ambas proteínas son requeridas para el anclaje a mebrana, lo que sugiere que NarC es una parte estructural de la nitrato reductasa respiratoria temófila.

    Durante la caracterización de los mutantes en narC y narl se obsevó que la forma soluble de NarG, producida en ambos mutantes, es inactiva con donadores artificiales de electrones, y este hecho se relaciona con una sensibilidad a proteasas, al igual que en mutantes afectados en la chaperona específica (narJ::kat).

    Por tanto se propone la hipótesis de que es necesaria una unión a la membrana antes de la activación de NarG. Para probarl