Resumen de Estandarización de un protocolo sencillo para la extracción de adn a partir de quesos frescos, semi-curados y curados de cabra

A.M. Canales, M.R. Baquero, Juan Vicente Delgado Bermejo, A. Martínez

• español

  El queso es el producto fresco o madurado, sólido o semisólido, obtenido de la leche total o parcialmente desnatada, coagulado total o parcialmente por la acción del cuajo, por un proceso de acidificación o por la adición de una enzima proteolítica (coagulación enzimática). Muchos quesos de cabra se elaboran con leche de una raza determinada y así queda recogido en el pliego de condiciones de las denominaciones de origen, aunque no se dispone de un sistema de trazabilidad genética para verificarlo. La trazabilidad genética se basa en la identificación de los animales y sus productos a través del estudio de secuencias específicas de ADN variables entre los individuos que permiten distinguir entre ellos. El futuro de las razas autóctonas pasa por el reconocimiento y valoración de sus productos. El disponer de un método para verificar la raza productora de la leche utilizada en la elaboración de los quesos sería una importante herramienta para detectar fraudes en estos productos protegidos vinculados a un genotipo determinado. Para realizar la trazabilidad genética es necesario analizar ADN con una suficiente concentración y pureza, pero los métodos de extracción de ADN disponibles hasta el momento producen un bajo rendimiento de ADN. El objetivo del presente estudio fue la estandarización de un método de extracción de ADN, que diera una buena calidad a partir de diferentes maduraciones de quesos de cabra. Se seleccionaron 15 muestras de queso de leche de cabra 100% con diferentes tipos de maduración: 5 quesos frescos, 5 quesos semicurados y 5 quesos curados. En el protocolo de extracción se utiliza un buffer de incubación de Edwards (Tris 10mM, pH = 8; EDTA20mM, 0,5% SDS, NaCl 2mM), 2-Mercaptoethanol-d6, una modificación del buffer de lisis de Tiocianato de Guanidina (NH2C(=NH)NH2 · HSCN) y columna de sílice. Terminado el proceso de extracción, se procede a la cuantificación utilizando 2 μL de ADN extraído, obteniendo la concentración de ADN y las ratios de absorbancia con los parámetros de 260/230 y 260/280. Con el método de extracción de ADN modificado y estandarizado se obtuvieron suficientes concentraciones de ADN, que van de 21,05 a 214,70 ng/μL. Se ha estandarizado un protocolo sencillo y barato para la extracción de ADN genómico a partir de muestras de quesos de cualquier tiempo de maduración que puede ser utilizado en posteriores análisis genómicos.

• English

  Cheese is the fresh or matured product, solid or semi-solid, obtained from totally or partially skimmed milk, coagulated totally or partially by the action of rennet, by an acidification process or by the addition of a proteolytic enzyme (enzymatic coagulation). Many goat cheeses are made with milk from a specific breed and this is stated in their specifications as part of the protected designations of origin, however, there is no traceability system for this factor. Genetic traceability is based on the identification of animals and their products through the study of specific DNA sequences that vary between individuals and allow them to be distinguished from one another. The future of native breeds depends on the recognition and valuation of their products. The availability of a method for identifying the breed that produces the milk used in the production of cheese would be an important tool for preventing fraud in these protected products linked to a specific genotype. The availability of a DNA extraction technique with which a sufficient concentration and purity can be obtained at a low cost, without much work effort in the laboratory and in a short time is of interest to many researchers and technicians. The objective of the present study was the standardization of a DNA extraction method, which would give a good quality from different ripening of goat cheeses. Fifteen samples of 100% goat milk cheese with different types of ripening were selected: 5 fresh cheeses, 5 semi-cured cheeses and 5 cured cheeses. In the extraction protocol, an Edwards incubation buffer (Tris 10mM, pH = 8; EDTA20mM, 0.5% SDS, NaCl 2mM), 2-Mercaptoethanol-d6, a modification of Guanidine Thiocyanate lysis buffer (NH2C(=NH)NH2 - HSCN) and silica column are used. After the extraction process was completed, quantification was performed using 2 μL of extracted DNA, obtaining DNA concentration and absorbance ratios with the parameters of 260/230 and 260/280. With the modified and standardized DNA extraction method, sufficient DNA concentrations were obtained, ranging from 21.05 to 214.70 ng/μL. A simple and inexpensive protocol has been standardized for the extraction of genomic DNA from cheese samples, with any type of maturity and which allows obtaining no impurities and high concentrations of DNA for genomic analysis.