Detección inmunohistoquímica de la mutación BRAF V600E en el carcinoma papilar de tiroides: evaluación frente a la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real
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Miguel Paja Fano [1] ; Aitziber Ugalde Olano [1] ; Elena Fuertes Thomas [1] ; Amelia Oleaga Alday [1]
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[1] Hospital Universitario de Basurto
Hospital Universitario de Basurto
Bilbao, España
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- Localización: Endocrinología, Diabetes y Nutrición, ISSN-e 2530-0164, Vol. 64, Nº. 2, 2017, págs. 75-81
- Idioma: español
- Títulos paralelos:
- Immunohistochemical detection of the BRAF V600E mutation in papillary thyroid carcinoma: evaluation against real-time polymerase chain reaction
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Resumen
- español
Introducción La mutación V600E de BRAF (protooncogén B-Raf) asocia mayor riesgo de persistencia y recidiva en el carcinoma papilar de tiroides, y puede modificar la cirugía o el seguimiento. Las tecnologías de biología molecular empleadas en su detección son caras y técnicamente demandantes. Recientemente se ha propuesto la evaluación inmunohistoquímica (IHQ), más sencilla y asequible, que permitiría universalizar su evaluación.
Objetivo Comparar los resultados y el coste económico del estudio IHQ frente a la PCR en tiempo real (RT_PCR) para la detección de BRAF V600E en los carcinomas papilares de tiroides. Se incluyó el análisis de las diferencias clínico-patológicas según el resultado por RT_PCR.
Métodos Estudio prospectivo sobre 82 muestras consecutivas, 54 de ellas biopsias con aguja gruesa. El estudio IHQ se realizó con el anticuerpo monoclonal murino VE-1, y fue categorizado como positivo o negativo. La detección mediante RT_PCR se realizó con la prueba diagnóstica Cobas® 4800 (Roche) sobre ADN extraído del tejido fijado por microdisección manual.
Resultados Ambas técnicas fueron concordantes en 81 casos (98,8%), con un resultado discordante, positivo en la IHQ y negativo en la RT_PCR, atribuido a heterogeneidad histológica. Solo en gasto de material diagnóstico, la IHQ logra un ahorro superior al 50% frente a la técnica molecular.
Conclusiones La detección IHQ de la mutación BRAF V600E presenta una elevada fiabilidad, sin falsos negativos, en muestras adecuadamente procesadas. Su empleo permite abaratar costes y generalizar su empleo, especialmente en centros sin acceso rutinario a técnicas de biología molecular.
- English
Introduction The BRAF V600E mutation is the most common genetic change in papillary thyroid carcinoma and is associated with a poorer clinical course. Usual methods for its study (DNA sequencing or molecular test based on PCR) are expensive and time-consuming. Recently, immunohistochemistry (IHC) for BRAF mutation has been introduced.
Objective To compare the results of IHC and real time PCR (RT-PCR) in the detection of BRAF V600E mutation in papillary thyroid carcinoma. Analysis of clinical and pathological differences depending on RT-PCR results is included.
Methods A prospective study was performed in 82 consecutive samples, 54 of them taken through a core needle biopsy. IHC was performed on tissue fixed for 24hours with 10% neutral formalin using the anti-BRAF V600E (VE-1) mouse monoclonal primary antibody and was rated as positive or negative. DNA was extracted from formalin-fixed, paraffin-embedded tissues by manual microdissection, and BRAF mutation was detected by RT-PCR using the Cobas® 4800 BRAF V600 mutation test (Roche).
Results Both techniques were concordant in 81 cases, and BRAF was positive in 49. Discordance appeared in a follicular variant showing positive IHC and negative RT-PCR, attributed to histological heterogeneity. Cost of materials for IHC was less than half of the cost for RT-PCR.
Conclusions IHC appears to be a reliable, economical and easily available alternative to molecular biology techniques for routine detection of the BRAF V600E mutation in papillary thyroid carcinoma patients, provided optimal fixation conditions are used. It may be a useful technique in hospitals with no access to molecular biology techniques.
- español
