Resumen de Expresión y purificación del antígeno preS1/2 y su utilidad en el estudio de la patogenia de la infección por el virus de la hepatitis B

Masyelly D. Rojas P., Juan Camilo Valencia Molina, Daniela Montes Berrueta, Gery Rosmary Ruiz Carrillo, Leidith Berrueta Carrillo, Darrell L Peterson, Lisbeth Berrueta Carrillo, Siham Salmen

• español

  El preS1/2 es parte de las proteínas de envoltura del virus de la hepatitis B (VHB), con funciones importantes en la inmunopatogenia de la enfermedad. Para su estudio es necesario contar con la proteína pura y así dilucidar su participación en el daño generado en el tejido hepático. Para ello se procedió a la expresión del preS1/2 previamente clonado en el vector peT3d, en la cepa de E coli HMS174 (DE3), seguido por su purificación mediante columnas de afinidad hacia residuos de histidina (6xhistidina) y finalmente sometidas a liberación de contaminantes mediante el uso de columnas de afinidad hacia endotoxina y filtración por centrifugación, de esta manera utilizarla para evaluar su efecto sobre hepatocitos humanos. El procedimiento utilizado permitió obtener 1,5 mg de proteína pura funcionalmente estable por cada litro de medio de cultivo. En este trabajo se describe un método sencillo de expresión y purificación del preS1/2 recombinante y se evidencia la obtención de un producto intacto, con potencial uso en estudios funcionales y futuros ensayos terapéuticos

• English

  The preS1/2 belongs to the envelope proteins of the hepatitis B virus (HBV), and has an important role in the pathogenesis of the disease. A pure protein is important for their study, and thus elucidates their involvement in the liver tissue damage observed during the diseases. For this purpose preS1/2 previously cloned into the pET3d was expressed in E. coli strain HMS174 (DE3), subsequent was purified by affinity columns histidine residues (6xhistidine) and finally treated to release contaminants by using affinity columns endotoxin and filtration by centrifugation, thereby used it to assess their effect on human hepatocytes. The procedure yielded 1,5 mg pure protein per liter of culture medium, functionally stable. In this paper we describe a simple method of expression and purification of preS1/2, which is an intact product with potential use in functional studies and future therapeutic trials