mRNA purification from Musa spp. leaves

• Autores: M. Colmenares, C. Giménez
• Localización: Revista de la Facultad de Agronomía de La Universidad del Zulia, ISSN-e 2477-9407, Vol. 27, Nº. 2, 2010, págs. 218-231
• Idioma: inglés
• Títulos paralelos:
  • Purificación de ARNm a partir de hojas de Musa spp
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• Resumen
  • español

    Los compuestos fenólicos de las hojas de banana causan mucha interferencia durante la extracción y aislamiento de ácidos nucleicos, por lo que se requiere mejorar los métodos para la purificación de ARN, con el objeto de obtener cantidades adecuadas de ARN mensajero de calidad, para realizar estudios de expresión genética. En esta investigación, se probaron dos métodos para la purificación de ARN total a partir de hojas de Musa spp., un método modificado basado en la sal de bromuro de hexadeciltrimetilamonio (CTAB) y el método convencional del fenol caliente. Adicionalmente se evaluó el efecto de diferentes antioxidantes como el mercaptoetanol, el dithiothreitol (DDT) y la Polivinilpolipirrolidona (PVP). El mercaptoetanol al 1% en el amortiguador de extracción, fue el mejor antioxidante. Sin embargo, concentraciones mayores al 1% de mercaptoetanol o DDT disminuyen la recuperación del ARN total. Todos los protocolos ensayados mostraron contaminación con ADN, el cual fue eliminado mediante una rigurosa digestión con ADNse. En conclusión el protocolo modificado basado en la sal de CTAB fue adecuado para la extracción de ARN total a partir de hojas de Musa, suplementado con 1% de mercaptoetanol en el amortiguador extracción seguido de una digestión rigurosa con ADNsa.

  • English

    Phenolic compounds of banana leaves cause much interference during the nucleic acids extraction and isolation. Therefore, improvement of RNA purification methods to achieve an adequate quality and quantity mRNA for expression analysis is required. A modified cetyl-trimethylammonium bromide (CTAB) and conventional Hot Phenol were tested for total RNA purification from leaves of Musa spp. Furthermore, the antioxidants; mercaptoethanol, dithiothreitol (DDT) and Polyvinylpyrrolidone (PVP) were evaluated.

    Mercaptoethanol (1%) in the extraction buffer was the best antioxidant.

    However, high concentrations of mercaptoethanol or DDT decreased total ARN recovery. All the protocols used showed DNA contamination, which was eliminated by DNase digestion. In conclusion, a modified CTAB protocol is suitable for RNA purification from Musa leaves, using mercaptoethanol, as antioxidant agent at 1% in the extraction buffer followed by rigorous DNase digestion.