Identificación de una proteína microsomal captadora del esteroide anabolizante estanozolol en microsomas hepáticos y de cáncer de mama

• Autores: Luis D. Boada, L. Fernández, Manuel Zumbado Peña, Octavio Pérez Luzardo, Ricardo Chirino Godoy
• Localización: Revista de la Academia Canaria de Ciencias: = Folia Canariensis Academiae Scientiarum, ISSN 1130-4723, Vol. 8, Nº. 2-4, 1996, págs. 107-124
• Idioma: español
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    La fraccion microsomal del higado de rata contiene v arias proteinas que captan hormonas esteroideas. En trabajos previos estudiamos la captation de [3H]Dexametasona ([3H]DEX) por microsomas hepaticos '/// vitro", y encontramos que dicho esteroide es deplazado por todos lo glucocorticoides naturales. por la progesterona. y por algunos 17a-alquil-esteroides. como los estrogenos etinilestradiol y mestranol y los androgenos estanozolol (ES) v danazol. Segun experimentos previos el ES puede inhibir la union de [3H]DEX a los microsomas "in vitro" mediante un mecanismo alosterico. Este dato sugeria la posibilidad de que el ES se uniera en realidad a otra proteina microsomal. distinta de la que capta [3H]DEX. pero capaz de interactuar con ella. En el presente trabajo. hemos utilizado |3H]ES para intentar demostrar que existe un lugar de union microsomal especifico para este androgeno anabolizante. Hemos encontrado. por primera vez, que los microsomas hepaticos contienen un lugar de union especifico para el [3H]ES. La interaccion entre ambos sigue una cinetica de saturacion correspondiente mi lugar simple de union, con una Kd de 37 ± 1.3 nM, y un numero maximo de lugares de union de 49 ± 2 pmol/mg de proteina. En experiments de competicion encontramos que solo el ES y el danazol, entre mas de 120 compuestos estudiados. son capaces de competir con el [3H]ES por unirse a los microsomas hepaticos. Su naturaleza proteica quedo establecida por la desaparicion de la capacidad de captation de [3H]ES que sufren los microsomas tratados con proteasas. y a pH extremos.

    asi como por la disminucion de los mismos en animales tratados con cicloheximida (CHX), un inhibidor de la sintesis proteica. La proteina captadora de [3Ef]ES fue detectada en muchos tejidos de rata y humanos. hallandose su maxima concentracion en higado. Al contrario que los lugares de union de [3HJDEX. la proteina captadora de [3H]ES existe en cantidades similares en higados de ratas de ambos sexos. y tambien abimda desde el dia del nacimiento. Estos datos sugieren que los lugares de union para [3H]DEX y para [3H]ES residen en dos proteinas diferentes. aunque capaces de interactuar entre ellas.

    Dado que el ES ha sido utilizado en el tratamiento del cancer de mama a\ anzado. tambien estudiamos la posible presencia de esta proteina en microsomas procedentes de muestras de cancer de mama humano. Encontramos que estos contienen concentraciones muy variables del lugar de union para [3H]ES (rango: 0. 1 a 13 pmol/mg de proteina). y por termino medio mas elevadas que las de los tejidos de rata, con la exception del higado. Este hallazgo abre nuevas perspectivas para comprender la acumulacion y utilization de esteroides por parte de la celula tumoral.

  • English

    Male rat liver microsomes contain a [3H]Dexamethasone binding site, capable of binding glucocorticoids and progesterone. We have previously shown that the 17a-alkylated androgen stanozolol can inhibit the [3H]De\amethasone binding to microsomes through a negative allosteric mechanism, which gives rise to the possibility of its interaction with a different binding site. In this study, the existence of a single-saturating binding site, capable of binding the radioactive steroid with a BmM of 49 ± 2 pmol/mg protein and a kcl of 37 ± 1.3 nM was demonstrated using [3H]Stanozolol. In competition experiments, only stanozolol and danazol were able to compete with [3 H] Stanozolol for its binding to microsomes, among more than 120 steroids and other compounds tested. The binding of [3H]Stanozolol was depressed after protease treatment of microsomes, or after administration of cycloheximide to adult male rats for 24 h. which suggests its proteic nature. The [3H]Stanozolol binding site was detected in many tissues of the rat. with the highest concentrations being found in the liver. It was also found in quite variable concentration (range: 0. 1 to 13 pmol/mg protein) in the microsomal fraction of human breast cancer specimens. It was detected from birth, increasing afterwards in concentration and reaching a peak at two-three months of age. This is the first experimental verification of the existence in liver microsomes of a specific binding site for some 17a-alkylated androgens, such as stanozolol and danazol. different from the Androgen Receptor or the [3H]Dexamethasone binding site. Its presence in breast cancer microsomes opens a new perspective for understanding steroid accumulation and transformation bv tumor