Resumen de Aplicación de dos biomarcadores para el análisis de lesiones en el DNA de bivalvos marinos
Giovanni Sotil, Rafael Alvis, Juan C. Francia, Betty Shiga
El presente trabajo describe la estandarizacion de las tecnicas del Test de Micronucleo (MN) y Ensayo Cometa para la evaluacion del dano en el DNA de bivalvos marinos. La importancia de estas tecnicas radica en que permiten evaluar la respuesta temprana al estres ocasionado por agentes contaminantes y cambios ambientales. Tejidos branquiales de Semimytilus algosus y Aulacomya ater fueron utilizados para tratamientos in vivo e in vitro. Los tejidos fueron expuestos a los agentes mutagenicos Mitomicina C en concentraciones de 0,02; 0,04 y 0,06 x 10-6 M y H2O2 en una concentracion de 100 ¿ÊM con tiempos de evaluacion de 1, 3, 6, 24 y 48 h. Diferentes soluciones para la colecta del tejido y aislamiento celular fueron evaluados obteniendo una mayor viabilidad celular en la solucion salina CMFS, pH 7,3; en frio. El Test de Micronucleo se modifico en la forma de obtener el disgregado celular, realizando la hipotonizacion en Citrato de sodio 0,9%, fijacion en metanol por segundos posterior al frotis y la tincion con Giemsa 2%. La estandarizacion del Ensayo Cometa Alcalino, descrita por Wilson et al. (1998), se realizo modificando la suspension celular en agarosa LMP (1% en solucion Kenny, pH 7,5), la exposicion a solucion de lisis (pH 10 con DMSO y Triton) con variaciones en el tiempo de 1 a 16 h, y la electroforesis en solucion alcalina pH 13,7 y tincion con Bromuro de etidio y Nitrato de plata para geles de agarosa. Los cambios realizados en ambas tecnicas permitieron obtener un alto numero celular con morfologia definida, observandose macrolesiones como la formacion de MN y aberraciones nucleares, y la determinacion cualitativa de microlesiones observadas por fragmentacion y migracion del DNA.
