Caracterització de la infecció pel virus de l'hepatitis C en el marc del trasplantament hepàtic: estudi de l'expressió dels receptors d'entrada i dels antigens virals

• Autores: Laura Mensa Garrigosa
• Directores de la Tesis: Rosa Miquel (dir. tes.), Sofía Pérez del Pulgar Gallart (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2014
• Idioma: catalán
• Tribunal Calificador de la Tesis: Antoni Rimola Castellá (presid.), Josep Quer Sivila (secret.), Federico Rojo (voc.)
• Materias:
  • Ciencias médicas
    • Ciencias clínicas
      • Patología clínica
    • Medicina interna
      • Gastroenterología
      • Enfermedades infecciosas
    • Patología
      • Histopatología
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en:  TDX  Dipòsit Digital de la UB 
• Resumen

  • La presente tesis doctoral está centrada en el estudio de la expresión de los receptores de entrada del virus de la hepatitis C (VHC) y los antígenos virales en muestras de hígado parafinadas de pacientes sometidos a un trasplante hepático (TH). La primera parte del estudio está basada en la caracterización y análisis, mediante técnicas de inmunofluorescencia y microscopia confocal, de la expresión de los receptores de las tight junctions claudina-1 (CLDN1) y ocludina (OCLN) así como el receptor de membrana basolateral scavenger receptor class B type 1 (SR-B1). Asimismo se ha hecho el estudio de la cinética viral precoz con muestras de suero obtenidas antes y después del TH. Los resultados obtenidos muestran que la localización de las proteínas CLDN1 y OCLN resta inalterable en el polo apical de la célula, donde colocalizan fuertemente independientemente de la fase de la infección. También se demuestra que existe una correlación significativa entre: 1. los niveles de SR-B1 en el momento de la reperfusión del nuevo órgano y la disminución de la carga viral durante las primeras 24 horas posteriores al TH; y 2. los niveles de CLDN1 y OCLN y el incremento de la carga viral a la semana después del TH. Además, existe un incremento significativo de las proteínas de las tight junctions un año después del TH, independientemente del tipo de recidiva de la infección. En la segunda parte del trabajo se analiza la expresión de los antígenos virales core y NS5A y se determina la colocalización de ambas proteínas y su distribución relativa versus las estructuras celulares denominadas lipid droplets. Los resultados muestran que en un 75% de las biopsias de fase aguda analizadas es posible detectar el antígeno core, cuya expresión se limita a los hepatocitos. El marcaje es citoplasmático, granular y con diferentes grados de intensidad. El patrón de distribución de la tinción es difuso, con cierta tendencia a concentrarse en las zonas periportales. Existe una correlación significativa entre el porcentaje de células core positivas y: 1. la actividad inflamatoria en el lobulillo; y 2. los niveles de las tranasminasas AST y ALT. La detección de la expresión se asocia de forma significativa con la carga viral y existe colocalización entre NS5A, core y ADRP (marcador de las lipid droplets). Esta colocalización se da en forma de estructuras circulares (siendo NS5A la proteína que se sitúa en la parte más periférica) y demuestra por pimera vez in vivo importancia de las lipid droplets en la replicación y ensamblaje del VHC. Los resultados obtenidos en esta tesis doctoral pueden ser relevantes para diseñar estrategias basadas en el uso de anticuerpos o pequeñas moléculas que bloqueen los receptores de entrada o inhiban su expresión con el objetivo de retrasar o prevenir la recidiva de la infección post-TH. Asimismo, una mejor comprensión del ensamblaje del virus y los factores del huésped que están implicados, puede contribuir a encontrar nuevas dianas terapéuticas y al desarrollo de una vacuna capaz de erradicar el VHC. Éstos estudios han estado presentados en la tesis en formato artículo, concretamente en un compendio de 2 artículos: 1. Hepatitis C virus receptors claudin-1 and occludin after liver transplantation and influence on early viral kinetics. Mensa L, Crespo G, Gastinger MJ, Kabat J, Pérez-del-Pulgar S, Miquel R, Emerson SU, Purcell RH, Forns X. 2. Imaging of hepatitis C virus infection in liver grafts after liver transplantation. Mensa L, Pérez-del-Pulgar S, Crespo G, Koutsoudakis G, Fernández-Carrillo C, Coto-Llerena M, Miquel R, Allende H, Castells L, Navasa M, Forns X.