Identificacion, mutagenesis y analisis transcripcional de los genes nap necesarios para la reduccion periplasmica del nitrato en rhodobacter sphaeroides dsm 158

• Autores: Mónica Gavira
• Directores de la Tesis: Conrado Moreno Vivián (dir. tes.), Francisco Castillo Rodríguez (codir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2000
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Francisco Gracia Navarro (presid.), Rafael Blasco Pla (secret.), Emilio Fernandez Reyes (voc.), Eulogio J. Bedmar (voc.), José María Vega Piqueres (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
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• Resumen

  • El sistema de reducción periplásmaica del nitrato en Rhodobacter sphaeroides DSM 158 está codificado por siete genes que forman la unidad trasncripcional nap KEFDABC. Estos genes están localizados en un plásmido y existen evidencias de transferencia horizontal de dichos genes nap entre diferente estirpes bacterianas. Los genes nanpABC son esenciales y los genes napKEFD son necesarios para la reducción óptima del nitrato in vivo. La nitrato reductasa periplásmica es un díametro formado por una subunidad catalítica, codificada por el gen napA, y un citocromo c soluble,codificado por el gen napB, que recibe los electrones de la proteína NapC, un citocromo c unido a la membrana.

    NapK y NapE son proteínas integrales de la membrana que podrían facilitar la interacción de NapC con una quinol oxidasa, mientras que NapD y NapF son proteínas solubles que se localizan en el citoplasma y podrían participar en el procesado y exportación del complejo NapAB al periplasma. El péptido señal con doble arginina dirige a las proteínas por la vía de secreción Tat, que sólo transporta holoproteínas plegadas. Este péptido señal de la proteína NapA no permite la exportación de la fosfatasa alcalina debido a que no se forman los puentes disulfuros necesarios para el plegamiento correcto de la enzima en el ambiente reductor del citoplasma. Por el contrario, la proteína NapA sí se transporta por esta vía Tat porque adquiere sus cofactores ( un centro sulfoférrico y un dinucleótido de molibdopterina y guanina) en el citoplasma y se pliega sin necesidad de formación de puentes disulfuros. El promotor nap es dependiente del factor general y se ha identificado el sitio de inicio de la transcripción del operón nap exacatamente a diez nucleótidos de la caja-10 de unión de dicho factor sigma. El transcrito nap tiene un tamaño de 5,5 kb y presenta la máxima expresión cuando las células se cultivan en condiciones heterotróficas, en