Capacidad transactivadora del gen pttg1 y su implicación en tumorigénesis
- Autores: Ana Romero Franco
- Directores de la Tesis: Antonio Gonzalo Castellano Orozco (dir. tes.), Jaime Muñoz Franco (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Sevilla ( España ) en 2016
- Idioma: español
- Número de páginas: 180
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: Idus
- Resumen
Objetivos: Los objetivos planteados en esta tesis doctoral son los que se enumeran a continuación: 1) Estudiar la capacidad moduladora que ejerce el gen pttg1 sobre la expresión de genes relacionados con el microambiente del tumor, en células inmortalizadas de ratón NIH3T3. 2) Estudiar la capacidad transactivadora del gen pttg1 en células tumorales humanas y establecer nexos con su posible implicación biológica en el desarrollo del tumor. 3) Estudiar el efecto en el desarrollo tumoral de la sobreexpresión e interferencia del gen hpttg1 sobre el modelo animal de xenotransplante en mama con la línea celular de origen luminal MCF7.
Métodos: Durante el desarrollo de nuestro trabajo de investigación hemos realizado un amplio abanico de técnicas experimentales que abarcan desde la biología molecular hasta la experimentación con animales. A nivel molecular, para el estudio de la modulación de genes específicos, hemos realizado PCR en tiempo real y arrays de PCR, a su vez hemos llevado a cabo varios estudios de expresión génica en condiciones de sobreexpresión e interferencia de nuestro gen, mediante el uso de arrays de RNAm y hemos estudiado la capacidad de pttg1 para modular MCP1 mediante ensayos de transactivación. Los niveles de proteína han sido determinados mediante western blot y arrays de citoquinas. A nivel celular hemos empleado distintas líneas humanas y de ratón, realizado técnicas de transfección, citometría de flujo para determinación de ciclo celular, apoptosis o marcajes, realizado ensayos de viabilidad y de migración celular. Un aspecto destacable de nuestro trabajo ha sido la realización de xenotransplantes ortotópicos en mama empleando ratonas atímicas desnudas. El uso de estos modelos animales nos ha llevado también a desarrollar técnicas de análisis de imagen in vivo e histología.
Conclusiones: La sobreexpresión del gen pttg1 aumenta la expresión de citoquinas, como CXCL12, que podría intervenir positivamente en el desarrollo del microambiente del tumor y CCL2, que participará en el reclutamiento de mediadores del sistema inmune; La sobreexpresión del gen pttg1 regula la actividad de familias génicas relacionadas con adhesión focal e interacción con la matriz extracelular (ECM), mejorando la capacidad migratoria de los fibroblastos NIH3T3. Este proceso de migración, está íntimamente relacionado la adquisición de propiedades metastásicas; La interferencia del gen pttg1 sobre la línea de adenocarcinoma de mama MCF7, induce una disminución de la tasa de proliferación, parada en fase G0-G1, pérdida de adhesión al sustrato y muerte celular; La inhibición del gen pttg1 en xenotransplantes ortotópicos, generados con la línea celular MCF7, frena el desarrollo del tumor. Mientras que su sobrexpresión mejora el desarrollo de las células tumorales, aunque no le confiere per se la capacidad de metastatizar.
