Paper de la molècula adaptadora 3BP2 en la senyalització dels receptors leucocitaris de la família del CD150
- Autores: Ifigènia Saborit Villarroya
- Directores de la Tesis: Margarita Martín Andorra (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2007
- Idioma: catalán
- Tribunal Calificador de la Tesis: Enric Espel Masferrer (presid.), Francisco Lozano Soto (secret.), Conxi Mora Giral (voc.), Manel Juan Otero (voc.), Rosa Aligué Alemany (voc.)
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: TDX
- Resumen
La família del CD150, està formada per receptors de la superfamília de les immunoglobulines, expressats en la membrana de cèllules del sistema immune. Es caracteritzen per compartir una elevada homologia estructural i localitzar en la mateixa posició 23 del braç llarg del cromosoma 1. Els membres de la família CD84, CD150, CD229, CD244, CD319 i NTB-A presenten una regió intracellular amb, com a mínim, un motiu tirosina del tipus T-V/I-Y-XX-V/I. Aquest és el motiu consens dunió duna família de molècules adaptadores anomenades SAP i EAT-2. En humans, deficiències en SAP, són responsables duna immunodeficiència primària lligada al cromosoma X, caracteritzada per una extrema susceptibilitat al virus de lEpstein-Barr, amb mononucleosi infecciosa fulminant. Lobjectiu daquesta tesi ha estat identificar nous lligands intracellulars pel receptor CD244 i poder així, comprendre millor les funcions derivades de lactivació daquest membre de la família. Lactivació del CD244 (o 2B4) comporta una activació de la citotoxicitat i increment de la producció de lIFN-gamma de les cèllules NK i limfòcits T citotòxics CD8+. Mitjançant la tècnica del triple híbrid en llevats, hem trobat que la molècula 3BP2 interacciona directament ambla regió intracellular el CD244 en condicions de fosforilació. El 3BP2 és una molècula adaptadora dexpressió preferent en el cèllules de llinatge hematopoètic, que sense tenir cap activitat catalítica, té la capacitat de reclutar diferents proteïnes, formant un signalosoma i participant positivament en lactivació de cèllules hematopoiètiques. En humans, mutacions puntuals en el 3BP2, són responsables duna malaltia autosòmica dominant anomenada querubisme, caracteritzada per una degradació dels ossos de les maxilles, relacionat amb una disfunció dels osteoclasts. El primer objectiu de la tesi, va ser verificar i caracteritzar la interacció entre el receptor CD244 i ladaptador 3BP2 en cèllules humanes de NK. En condicions dactivació, es detectà interacció (coprecipitació i collocalització) entre ambdues proteïnes en la línia de cèllules NK,YT, en la què hem sobreexpressat el 3BP2 en pauta amb la proteïna verda fluorescent (EGFP). Aquesta interacció també la detectem en cèllules humanes de NK obtingudes de sang perifèrica seguint un protocol denriquiment, selecció i expansió amb IL-2. En aquest cas i per tal de detectar la proteïna endògena del 3BP2, fos necessària la producció dun anticòs monoclonal seguint un protocol de immunització de ratolins amb un pèptid del 3BP2. Seguidament passàrem a caracteritzar les vies de senyalització i respostes funcionals de lactivació del CD244 en un context dimplicació del 3BP2. Demostrem que el 3BP2 està afectant i potenciant la via dERK i la capacitat lítica de la cèllula NK. En canvi, ni lactivitat de la p38 ni la producció dIFN-gamma es veuen alterades per la presència o absència del 3BP2. Proposem el 3BP2 com a la molècula que dicta la dicotomia de la resposta de la cèllula NK. També analitzàrem la interacció directe del 3BP2 amb els altres membres de la família del CD150, mitjançant al tècnica del triple híbrid. Trobàrem que la regió intracellular del receptor CD229 (o Ly9) interacciona directament amb el 3BP2 en condicions de fosforilació. Sha descrit que el CD229 juga un paper atenuador en lactivació del TCR de la via dERK i del factor de transcripció NFAT en el limfòcit T. Els estudis realitzats en aquesta tesis, indiquen que el 3BP2 potencia la inhibició del CD229 mediada sobre lactivació del TCR.
Aquesta tesis ha caracteritzat la importància bioquímica i funcional de la molècula adaptadora 3BP2 en la senyalització de dos receptors de la família del CD150. Per una banda, al interaccionar amb el CD244 potencia la capacitat lítica de la cèllula NK. Per laltra, a lassociar-se amb el CD229, ladaptador 3BP2 incrementa latenuació de lactivació del limfòcit T. Per tant, en funció les parelles dunió que estableix durant lactivació daquests receptors, el 3BP2 pot jugar un paper positiu o negatiu en la resposta daquests dos tipus cellulars.
" SUMMARY:
"ROLE OF THE ADAPTOR MOLECULE 3BP2 REGULATING CD150 LEUKOCYTE RECEPTOR FAMILY FUNCTION" TEXT:
CD84, CD150, CD229, CD244, CD319 and NTB-A are members of CD150 family of leukocyte receptors, with the capacity to associate with the family of adaptors SAP and EAT-2 through a tyrosine motif in their cytosolic tail. In humans, SAP deficiencies are responsible for an immunodeficiency called X-linked lymphoprolipherative syndrome (XLP syndrome) characterized by an extreme susceptibility to Epstein-Bar virus. The main goal of this thesis was to identify and characterize new intracellular partners for CD244 (2B4) receptor. This receptor activates NK cell cytotoxicity and IFN-gamma production. Using three-hybrid system, we identified 3BP2 as a binding partner for the receptor. 3BP2 is an adaptor molecule, whose deficiency is linked to a human disease called querubisme, characterized by a degradation of maxillary bones related to osteoclast dysfunction. The interaction between the receptor and the adaptor was bioquemically characterized in an NK cell line and in NK cells from peripheral blood. Next, we studied the implications of 3BP2 during CD244 activation in NK cells. We demonstrated that 3BP2 potentates ERK pathway and cytotoxicity. However, p38 activation and IFN-gamma are not influenced by the adaptor. 3BP2 is established to be the molecule responsible for the dichotomy function of CD244. We also analyzed the interaction between 3BP2 and the other members of CD150 family using three-hybrid system. We found that CD229 (Ly9) can recruit the adaptor. It has been described that CD229 attenuates ERK and NFAT activation during TCR triggering in T lymphocytes. The studies developed in this thesis, indicate that 3BP2 enhances CD229 inhibition during TCR activation.
So, this thesis has bioquemically and functionally characterized the implication of the adaptor molecule 3BP2 in regulating the activation of two members of CD150 family of receptors. In one hand, by interacting with CD244, the adaptor enhances NK cytotoxicity. On the other, by associating with CD229, 3BP2 enhances the attenuation of T lymphocyte activation. So, 3BP2 depending on the signalosma complex that creates, positively or negatively regulates these types of cells response."
