Comparación de diferentes sistemas de expresión para la producción en plantas de proteínas del coronavirus del SARS y análisis de la estabilidad genómica de los vectores basados en el virus de la Sharka

• Autores: Beatriz García García
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2013
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Luis Enjuanes (presid.), Rosario Fernández (secret.), Varvara Maliogka (voc.), Mariano Cambra (voc.), Marta Izquierdo Rojo (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • El uso de plantas como biofactorías para la producción de proteínas foráneas despierta un gran interés. Las plantas transgénicas y la expresión transitoria utilizando tanto vectores virales como no virales constituyen las principales estrategias empleadas para conseguir este objetivo. En la primera parte de este trabajo de tesis se emplearon los tres sistemas de expresión para la producción de varias proteínas del SARS-CoV. Los resultados llevaron a la conclusión de que cada proteína necesita ser estudiada por separado con el fin de optimizar el proceso de expresión, a pesar de que la exploración de todas estas posibilidades se presenta como una buena aproximación inicial. Así, el uso combinado de los tres sistemas de expresión ha demostrado ser muy útil para la producción conjunta de varias proteínas del SARS-CoV, destacando el empleo de vectores virales.

    La segunda parte del trabajo se centró en el estudio de las limitaciones de los sistemas de expresión virales debido a los fenómenos de recombinación de RNA cuando se utilizan vectores virales derivados del Plum pox virus (PPV). PPV es un potyvirus que, bajo condiciones experimentales, es capaz de infectar diferentes especies herbáceas. Mediante el uso de un clon completo del PPV, fue posible la manipulación genética de un virus con genoma RNA, introduciendo diferentes secuencias foráneas entre las secuencias virales NIb y CP. El análisis detallado de todos los experimentos de infección llevados a cabo en huéspedes herbáceos llevaron a la conclusión de que el tamaño es el factor principal cuando se considera la estabilidad de inserción, pero no el único. La secuencia nucleotídica, así como factores del huésped deben tenerse en cuenta también. Además, parece que la recombinación en el PPV que tiene lugar durante la síntesis de las dos cadenas de RNA virales no tiene muchos requisitos estrictos de secuencia y se ve favorecida por la similitud de secuencia y por la aparición de los mismos nucleótidos en los sitios de recombinación.

    PALABRAS CLAVES DE BÚSQUEDA PPV, SARS-CoV, biofactorías, sistemas de expresión de proteínas, vectores virales, recombinación.