Análisis mutacional del centro activo de polimerización de la DNA polimerasa del bacteriófago 0/29
- Autores: Javier Saturno Villa
- Directores de la Tesis: Margarita Salas Falgueras (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 1999
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Ortín Montón (presid.), José Berenguer Carlos (secret.), Juan Antonio García Álvarez (voc.), Crisanto Gutiérrez Armenta (voc.), Paloma López García (voc.)
- Materias:
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- Resumen
En esta tesis doctoral he desarrollado y puesto a punto un nuevo método bioquímico que permite calcular los parámetros cinéticos de selección de nucleótidos correctos e incorrectos para DNA polimerasa con actividad exonucleasa 3'-5'. Hemos aplicado este método para calcular la constante de Michaelis de la DNA polimerasa de 029 por el nucleótido correcto e incorrecto, y hemos estudiado los parámetros de discriminación de DNA polimerasas mutantes puntuales en residuos críticos de motivos altamente conservados entre las distintas familias de polimerasas. Mediante estudio de mutagénesis dirigida hemos podido caracterizar la implicación bioquímica del residuo de Lisina del motivo conservado B, absolutamente invariante en polimerasas DNA dependientes, en la unión y estabilización del dNTP en el centro activo de la DNA polimerasa de 029, y también la implicación del primer residuo de ácido aspartico del motivo conservado C en la catálisis y la traslocación de la DNA polimerasa de 029.
