Identificación, clonaje y caracterización de DIO-1 un nuevo gen implicado en apoptosis

• Autores: David García Domingo
• Directores de la Tesis: Carlos Martínez Alonso (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2003
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Ignacio Moreno de Alborán Vierna (secret.), Balbino Jose Alarcon Sanchez (voc.), Manuel Izquierdo Pastor (voc.), Miguel Torres Sánchez (voc.)
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• Resumen

  • La apoptosis o muerte celular programada es un fenómeno fisiológico de crucial importancia para el normal desarrollo y homeostasis de los organismos multicelulares. El gen DIO-1 (death inducer-obliterator 1) fue identificado por nosotros en la línea celular pre-BI WOL-1, mediante la técnica de clonaje diferencial de genes conocida como "Differential Display PCR", tras el estímulo apoptótico de deprivación de IL-7. Su secuencia proteica presenta homologías con dominios de activación transcripcional, una secuencia de localización nuclear de localización nuclear bipartita, un dedo de zinc tipo PHD y una región rica en lisinas en el extremo carboxilo terminal.

    Tras ciertos estímulos apoptóticos apropiados, sus niveles de ARNm y proteína aumentan muy poco tiempo después de la presencia del estímulo, observándose que para ello precisa de su translocación nuclear. Su sobreexpresión en diferentes líneas celulares, así como en primordios de extremidades de pollo, indujo apoptosis, inhibible por Bcl-2 o z-VAD-fmk. La generación de un mutante carente de las señas de localización nuclear permitió descubrir su incapacidad para migrar al núcleo tras el estímulo apoptótico, incluso en condiciones que provocaron la translocación y aumento de los niveles de DIO-1. Puesto que la muerte inducida por DIO-1 era inhibible por inhibidores de caspasas, quisimos averiguar la relación entre DIO-1 y las caspasas.

    Para ello, analizamos los niveles de las procaspasas 3 y 9 y de sus actividades tras la expresión de DIO-1 y del mutante sin NLS en células FL5.12. Encontramos que DIO-1 aumenta los niveles de dichas procaspasas y las actividades de sus formas activas, mientras que el mutante fue incapaz de producir este efecto, lo que sugiere que DIO-1 precisa de su translocación al núcleo para aumentar los niveles de caspasas. Además, células FL5.12 que expresaban establemente el mutante se vieron protegidas frente a la apoptosis inducid