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Características de acción de las exendinas sobre el transporte y metabolismo hepático y muscular de la glucosa, en estado normal y diabético tipo 2

  • Autores: Luis Arnés Pérez
  • Directores de la Tesis: María Luisa Villanueva-Peñacarrillo Molina (dir. tes.)
  • Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2008
  • Idioma: español
  • Tribunal Calificador de la Tesis: Enrique Blázquez Fernández (presid.), Elena Escudero Hernández (secret.), José Enrique Campillo Álvarez (voc.), Rosa María Arahuetes (voc.), Isabel Valverde Alonso (voc.)
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  • Resumen
    • ÍNDICE INTRODUCCIÓN ............................................................................ 1 PROPÓSITO................................................................................... 19 MATERIAL Y MÉTODOS ................................................................. 20 1. ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN.................................................. 20 2. MODELO DE DIABETES EXPERIMENTAL TIPO 2 (DT2) ................... 20 2.1. Coeficiente de utilización de la glucosa.................................... 20 3. MATERIAL BIOLÓGICO................................................................ 21 4. TRATAMIENTO CON EXENDINA-4 ................................................. 21 5. PÉPTIDOS E INHIBIDORES ........................................................ 22 6. ESTUDIO DE ENZIMAS DE SEÑALIZACIÓN CELULAR ...................... 23 7. PREPARACIÓN DE MEMBRANAS ................................................ 24 7.1. Músculo........................................................................ 24 7.2. Hígado................................................................................... 25 8. ACTIVIDAD PI3K........................................................................ 26 8.1. Inmunoprecipitación................................................................. 26 8.2. Formación de PIP3 .............................................................. 27 8.3. Extracción de lípidos............................................................. 28 8.4. Separación de lípidos......................................................... 29 9. PKB, p70s6k y MAPKs: TOTAL Y FOSFORILADA.......................... 30 9.1. Western blot .......................................................................... 30 i) Separación de proteínas ...................................................... 30 ii) Transferencia ........................................................................ 32 iii) Inmunodetección..................................................................... 32 10. ESTUDIO DE UNIÓN AL MÚSCULO ESQUELÉTICO ..................... 34 10.1. 125I-GLP-1 ....................................................................... 34 10.2. Protocolo de unión ......................................................... 34 II 11. EXPRESIÓN DEL GLUCOTRANSPORTADOR.......................... 35 11.1. ARNm.................................................................................. 35 i) Aislamiento del ARN ............................................................. 35 ii) Síntesis de ADNc ..................................................................... 36 iii) Reacción en cadena de la polimerasa a tiempo real....................... 37 11.2. Proteína.............................................................................. 38 12. TRANSPORTE DE GLUCOSA...................................................... 38 13. OXIDACIÓN Y UTILIZACIÓN DE GLUCOSA................................ 40 13.1. Producción de CO2 ........................................................... 41 13.2. Medida de piruvato .............................................................. 42 14. MEDIDA DE CONTENIDO EN GLUCÓGENO ........................... 43 15. MEDIDA DE INSULINA PLASMÁTICA....................................... 43 16. ACTIVIDAD GLUCÓGENO SINTASA a.................................. 44 17. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS.......................................... 45 RESULTADOS............................................................................ 46 1. EFECTOS DE LAS EXENDINAS SOBRE EL TRANSPORTE DE GLUCOSA, EN EL MÚSCULO ESQUELÉTICO DE LA RATA NORMAL......... 46 2. EFECTOS DE LAS EXENDINAS SOBRE LA ACTIVIDAD DE ENZIMAS DE SEÑALIZACIÓN CELULAR ................................................. 46 3. SEÑALIZACIÓN INTRACELULAR EN EL EFECTO DE LA EXENDINA-4 SOBRE EL TRANSPORTE DE GLUCOSA, EN EL MÚSCULO ESQUELÉTICO DE LA RATA NORMAL ....................................... 49 4. CARACTERÍSTICAS DE ACCIÓN DE LA EXENDINA-4, RESPECTO A LAS DEL GLP-1, EN EL MÚSCULO DE LA RATA NORMAL: estudio de unión a membrana .................................................................. 51 5. EFECTO DE LA EXENDINA-4 SOBRE EL METABOLISMO DE LA GLUCOSA, EN EL MÚSCULO ESQUELÉTICO DE LA RATA NORMAL......... 51 6. ACCIÓN DE LAS EXENDINAS, RESPECTO A LA DEL GLP-1, SOBRE EL TRANSPORTE Y METABOLISMO DE LA GLUCOSA EN EL MÚSCULO ESQUELÉTICO DE LA RATA DIABÉTICA TIPO 2 ................. 53 III 7. EFECTO DE LAS EXENDINAS, RESPECTO AL DEL GLP-1, SOBRE LA ACTIVIDAD DE ENZIMAS DE SEÑALIZACIÓN CELULAR, EN EL MUSCULO ESQUELÉTICO DE LA RATA DIABÉTICA TIPO 2 ................. 55 8. CARACTERÍSTICAS METABÓLICAS DE LA RATA NORMAL Y DIABÉTICA TIPO 2, TRAS TRATAMIENTO CON EXENDINA-4 ............... 58 9. EFECTO DEL TRATAMIENTO PROLONGADO CON EXENDINA-4 SOBRE EL TRANSPORTE DE GLUCOSA EN EL MÚSCULO ESQUELÉTICO DE LA RATA NORMAL Y DIABÉTICA TIPO 2 .................. 59 10. EFECTO DEL TRATAMIENTO PROLONGADO CON EXENDINA-4 SOBRE LA EXPRESIÓN DE GLUT-4, EN EL MÚSCULO ESQUELÉTICO DE LA RATA NORMAL Y DIABÉTICA TIPO 2....................................... 59 11. EFECTO DEL TRATAMIENTO PROLONGADO CON EXENDINA-4 SOBRE LA EXPRESIÓN DE GLUT-2, EN EL HÍGADO DE LA RATA NORMAL Y DIABÉTICA TIPO 2 ...................................................... 61 12. EFECTO DEL TRATAMIENTO PROLONGADO CON EXENDINA-4 SOBRE LA ACUMULACIÓN DE GLUCÓGENO HEPÁTICO, EN LA RATA NORMAL Y DIABÉTICA TIPO 2 ......................................... 61 DISCUSIÓN ............................................................................ 65 CONCLUSIONES ..................................................................... 74 BIBLIOGRAFÍA ....................................................................... 76 ABREVIATURAS.................................................................... 92


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