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Resumen de Técnicas de imagen aplicadas al estudio de la regeneración ósea y del efecto de la deferoxamina en un modelo in vivo de ratas Wistar

María Susana Sánchez Carrillo

  • español

    La regeneración ósea es un campo en plena expansión, debido a las implicaciones que la resección total o parcial de hueso tiene en pacientes que han sufrido traumas, tumores o infecciones óseas. Hay indicios en la literatura de que la deferoxamina, quelante del hierro, utilizada en intoxicaciones férricas entre otros, podría tener efecto sobre la regeneración ósea activando la vía del HIF-1?. Las técnicas de imagen se desarrollan a gran velocidad, encontrando técnicas más precisas y sensibles en el estudio de la regeneración ósea. La microtomografía computerizada (microCT) es un valioso método no invasivo, que combina el estudio de los datos anatómicos y funcionales a la vez, permitiendo una mejor caracterización y localización de las lesiones óseas. El microscopio de barrido (SEM-EDX) nos permite obtener imágenes muy detalladas de cada uno de los defectos así como llevar a cabo un microanálisis de los elementos fundamentales en la formación de hueso, el calcio, el fósforo y el oxígeno.

    OBJETIVOS: Este estudio tendrá una doble vertiente. Por un lado examinar cualitativamente la idoneidad de diferentes técnicas de imagen (fotografía, radiografía de rayos X, microCT y SEM) en el estudio de la regeneración ósea. Por otro lado, el estudio cuantitativo del efecto de la DFO como posible activador en la formación de nuevo hueso en defectos de tamaño crítico en un modelo de roedores in vivo.

    MATERIALES Y MÉTODOS: Las ratas Wistar utilizadas en este trabajo se han dividieron en dos grupos, uno que fue tratado con DFO durante 3 semanas y el segundo durante 6 semanas. Se realizaron dos defectos de 3 mm en la calota de cada rata, uno control con una esponja de colágeno y el otro con la esponja de colágeno y la DFO. En primer lugar se comparó cualitativamente la idoneidad y precisión de la fotografía, radiografía de rayos X, la microCT y el SEM-EDX como técnicas de imagen. Posteriormente se ha utilizado la microCT, a través del porcentaje de hueso formado y de los porcentajes del tipo de hueso, y el EDX, a través del porcentaje de oxígeno y del ratio Ca/P, como técnicas para cuantificar la cantidad de hueso formado y la calidad de este.

    RESULTADOS: Cualitativamente hablando, solo la microCT permite ver diferencias en el crecimiento óseo entre los defectos tratados con DFO y los defectos control a cualquier tiempo. Con todas las técnicas se aprecia resorción ósea a las 6 semanas de tratamiento. Cuantitativamente, con microCT se encuentran porcentajes de crecimiento óseo mayores en los defectos tratados con DFO tanto a las 3 como a las 6 semanas respecto de los controles. Sin embargo el porcentaje de hueso formado es mayor a las 3 semanas frente a las 6 en los defectos con DFO. El porcentaje de hueso de mayor calidad lo encontramos en las muestras tratadas con DFO a las 6 semanas. Con EDX encontramos que no hay diferencias en el porcentaje de oxígeno entre los defectos control y los tratados ni a las 3, ni a las 6 semanas. Pero si es mayor a las 6 semanas frente a las 3. El ratio Ca/P nos indica que la calidad del hueso formado es mayor conforme avanza el tiempo.

    DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES: Aunque el SEM permite llegar a ver estructuras más pequeñas, sólo la microCT es suficientemente completa para el estudio de la regeneración ósea. Las demás técnicas pueden ser complementarias a otras. La DFO tiene un efecto positivo sobre la formación de hueso a las 3 semanas y un efecto inhibitorio a las 6 semanas. Sin embargo, la calidad del hueso formado es mayor, cuanto más tiempo pasa.

  • English

    Bone regeneration is a research field of increasing interest due to the physical and emotional implications that total or partial bone resection have in patients who suffered traumas, tumors or bone infections. There are indications in the literature that deferoxamine, iron chelator, used in ferric intoxications among others, could have an effect on bone regeneration by activating the HIF-1? pathway. Furthermore, imaging techniques are developing at high pace, enabling more precise and more sensitive ways to study bone regeneration. Computed microtomography (microCT) is a valuable non-invasive method that combines the study of anatomical and functional data at the same time, allowing enhanced characterization and localization of bone lesions. The scanning microscope (SEM-EDX) makes it possible to obtain very detailed images of each bone's defect as well as carry out a microanalysis of the fundamental elements in the bone formation such as calcium, phosphorus and oxygen.

    OBJECTIVES: This study will be targeting two aspects. On one hand, it will qualitatively assess the suitability of different imaging techniques (photography, X-ray radiography, microCT and EDX) in the study of bone regeneration. On the other hand, it will quantitatively study the effect of DFO as a possible activator in the formation of new bone in critical size defects in a rodent model in vivo.

    MATERIALS AND METHODS: In this work, Wistar rats were divided into two groups: one that was treated with DFO for three weeks and another one for six weeks. Two defects of 3 mm were made in the calvaria of each rat, one control with a collagen sponge and another with a collagen sponge and DFO. At first, suitability qualitative comparison of photography, X-ray radiography, microCT and SEM-EDX was performed. Subsequently, microCT and SEM-EDX were used to carry out a quantitative analysis of regenerated bone and to assess its quality. Hence, microCT was used for its capacity to provide the percentage of new formed bone as well as the breakdown percentage of every bone type. SEM-EDX was rather used to measure the percentage of oxygen and the Ca/P ratio.

    RESULTS: Qualitatively, only microCT allowed us to see differences in bone regeneration when comparing defects treated with DFO to control at both 3 weeks and 6 weeks. With all techniques, bone resorption was observed at 6 weeks of treatment. Quantitatively, using microCT, bone growth percentages were higher in defects treated with DFO both at 3 and 6 weeks compared to controls. However, the percentage of bone formed is greater at 3 weeks compared to 6 weeks in DFO defects. Higher quality bone percentage was found in the group treated with DFO at 6 weeks. Using SEM-EDX, we found no differences in the percentage of oxygen between DFO and control groups neither at 3 nor at 6 weeks. However, oxygen percentage was greater at 6 weeks than at 3 weeks. The Ca/P ratio indicated that the quality of the new formed bone formed was getting greater as time goes by.

    DISCUSSION AND CONCLUSIONS: Although the SEM-EDX allowed us to see smaller structures, only microCT was complete enough for the study of bone regeneration. Other techniques (photography, X-Ray radiography) can be used to complement the assessment provided by microCT and SEM-EDX but can't substitute them. DFO had a positive effect on bone formation at 3 weeks and an inhibitory effect at 6 weeks. However, the quality of the bone formed is greater as time goes by.


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