Detección molecular de patógenos periodontales
- Autores: Mª José Adserias Garriga
- Directores de la Tesis: Josep Clotet (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat Internacional de Catalunya ( España ) en 2006
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Eduardo Chimenos Küstner (presid.), Lluís Giner Tarrida (secret.), Juan Basilio Monné (voc.), Jesús García Gil (voc.), Núria Casals Farré (voc.)
- Materias:
- Texto completo no disponible (Saber más ...)
- Resumen
Objetivo: Puesta a punto de un método de diagnóstico molecular para patógenos periodontales que pueda dar servicio a la Clínica Odontológica Universitaria.
Material: Medio Agar-Sangre y Heart Brain Infusion, cámara de anaerobiosis, microscopía de fluorescencia, Live/Dead Bacligth Bacterial Viability Kit L-07007, termociclador MJ Research, eppendorfs, puntas de papel, pipetas, fuente y cubetas de electroforesis.
Método: Para la puesta a punto de este método de diagnóstico molecular se realizaron controles positivos con cepas ATCC de los diferentes microorganismos propuestos: P. gingivalis, P. intermedia, H. actynomicetemcomitans, P. micros, T. forsythensis y F. nucleatum. Los cuales fueron crecidos en condiciones de anaerobiosis, para proceder a la extracción del DNA (se probaron 3 métodos de extracción: A, B y C. El método A es un método propio mientras que los otros dos han sido propuestos por distintos autores). Se llevó a cabo PCR del DNA de cada microorganismo, y los resultados se visualizaron a través de un análisis electroforético.
Por otra parte, se recogieron muestras clínicas de pacientes periodontales, a las cuales se extrajo el DNA y se analizó mdiante electroforesis en gel de agarosa al 2%.
Resultados: Se han establecido las temperaturas de annealing para los diferentes cebadores propuestos para los distintos microorganismos. Se ha escogido el método A por su buen resultado así como su rapidez y sencillez. Se ha establecido una correlación entre cantidad de bacterias e intensidad de bandas, lo que permite una determinación semicuantitativa. La sensibilidad e especificidad de las reacciones ha sido comprobada, con valores, en muchos casos, superiores a los reportados por otros autores. La amplificación también se produce en muestras clínicas más complejas y con baja cantidad de células.
