Clonación y expresión funcional del la ARN polimerasa de un virus de la gripe tipo A

• Autores: Enrique Jambrina Nafría
• Directores de la Tesis: Agustín Portela Moreira (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 1998
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Antonio García Álvarez (presid.), Juan Alfonso Ayala Serrano (secret.), José Antonio Melero Fondevilla (voc.), Ignacio Moriyón Uría (voc.), M. Luisa Celma Serrat (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
    • Virología
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• Resumen

  • Los virus de la gripe (VG) pertenecen a la familia "Orthomyxoviridae". Los miembros de esta familia se caracterizan por ser virus con envuelta y cuyo genoma está constituido por segmentos de RNA de banda simple y polaridad negativa. Los VG se clasifican en tres tipos: A, B, y C. Los VG tipo A y B son clínicamente relevantes en humanos, a pesar de lo cual la mayor parte de los estudios sobre la expresión del genoma de los VG se han centrado solamente en los VG tipo A. Con el fin de avanzar en el conocimiento de los procesos de expresión del genoma de los VG tipo B se han clonado y secuenciado los genes que codifican las proteínas PB1, PB2, PA y NP a partir del RNA Viral del VG B/Panamá/45/90. Estas proteínas constituyen las polimerasa viral en el caso de los VG tipo A.

    A partir de estos genes y empleando un sistema basado en un virus vacunal recombinante que expresa la RNA polimerasa del fago T7, se han expresado de forma transitoria en células de mamífera las proteínas PB1, PB2, PA y NP.

    Estas proteínas expresados en este sistema son funcionales, ya que pueden llevar a cabo la expresión de una RNA CAT modelo que contiene las secuencias promotoras para la RNA polimerasa viral. Utilizando este sistema se ha demostrado que las proteínas PB1, PB2, PA y NP constituyen el conjunto mínimo de proteínas virales necesarias para la expresión de un RNA modelo tipo B.

    Utilizando los plásmidos recombinantes que codifican los componentes de las polimerasas de los VG A/Victoria/3/75 y B/45/90, se ha podido demostrar que ambas polimerasas reconstituidas "in vivo", son capaces de expresar aunque con reducida eficiencia, RNAs modelos del otro tipo viral. Por otro lado, y utilizando estos plásmidos, no ha sido posible reconstituir RNPs funcionales formadas por proteínas de ambos tipos de VG.

    Las secuencias de aminoácidos correspondientes a los genes clonados a partir del VG B/Panamá/45/90 están altamente conservada