Estudi transcriptòmic i proteòmic de marcadors de lesió glomerular. Noves aproximacions diagnòstiques de la patologia glomerular
- Autores: Maribel Navarro Muñoz
- Directores de la Tesis: Josep Bonet i Sol (dir. tes.), Ramón Romero González (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2011
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Celestino Rey Joly (presid.), Alberto Martínez Castelao (secret.), José Manuel Valdivieso Revilla (voc.)
- Materias:
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- Resumen
En los últimos años, el campo de la nefrología ha experimentado un avance muy importante en la búsqueda de nuevas metodologías para mejorar el diagnóstico de la patología glomerular. Esta mejora en el diagnóstico, depende en gran medida del desarrollo de nuevas técnicas no invasivas de última generación como son: el análisis transcriptómico y proteómico de la orina. La orina es una de las muestras biológicas de más fácil obtención, no invasiva, y que puede proporciona una información muy valiosa en el diagnóstico clínico.
A pesar de los grandes avances en el análisis de la expresión génica, a nivel de la biopsia renal, existen problemas prácticos que limitan su uso en la práctica clínica diaria, debido a que la biopsia renal es un procedimiento invasivo que implica ciertas complicaciones. Es por ello que actualmente los esfuerzos se centran en el análisis de la expresión génica a nivel de la orina.
Un punto clave en la patogénesis de la enfermedad glomerular es la lesión del podocito, tanto en la disminución en el número de células como en cambios en los patrones de expresión de moléculas asociadas al podocito (B7-1, NPHS1, NPHS2, SyNPO). Los podocitos que se desprenden pueden ser detectados en el sedimento urinario, y los diferentes fenotipos de la lesión de los podocitos pueden relacionarse con ciertas formas de la enfermedad glomerular. Así, el análisis de la expresión génica en la orina podría ser abordado a nivel del ARN mensajero, y el sedimento urinario parece ser el escenario más adecuado, ya que contemplaría la presencia de podocitos entre otras células.
En esta tesis pudimos observar que la expresión de B7-1 y de NPHS1 en el sedimento urinario, a diferencia de NPHS2 y SyNPO, tiene un buen poder para discriminar pacientes con enfermedad glomerular de la población sana. Niveles altos de B7-1 y de NPHS1 se asociaron a la patología glomerular (GNM, GESF, NIgA, GNMP), excepto en el SNLM. Además, el análisis de la ratio B7-1: NPHS1 en el sedimento urinario, sería útil para detectar un aumento o disminución de la expresión de B7-1 en el podocito. Siendo de especial interés en la diferenciación entre el SNLM y la GESF, basándonos en el aumento de la ratio B7-1: NPHS1 observado en el sedimento urinario del SNLM.
La proteómica urinaria es otra técnica innovadora, y que aún no ha sido explotada en la misma medida que la transcriptómica. Los recientes avances en las técnicas proteómicas hacen más tangible su aplicabilidad en el campo de la proteómica clínica, y concretamente en la búsqueda de biomarcadores relacionados con la patología glomerular.
Actualmente, el "profiling" de la orina o análisis de perfiles, tanto a nivel de proteínas como de péptidos, está ganando popularidad en la búsqueda de nuevos biomarcadores asociados a la patología glomerular. Concretamente, las nuevas tecnologías gel-free acopladas a la espectrometría de masas constituyen una nueva plataforma de última generación para el análisis de la orina, pudiendo representar un paso importante en el diagnóstico no invasivo de la patología glomerular.
En esta tesis pudimos observar que la tecnología de microesferas magnéticas acoplada al análisis MALDI-TOF MS, es una plataforma útil para generar un perfil de péptidos de la orina relacionados con enfermedad glomerular, como son los péptidos de UMOD y de A1AT, respecto de la población sana. Niveles bajos de UMOD y altos de A1AT se asocian a la patología glomerular, y la diferencian con una alta sensibilidad y especificidad de la población sana. Además, de la asociación de éstos con la histología, se obtuvo una distribución que nos permitía diferenciar las formas proliferativas de la enfermedad glomerular de las no-proliferativas.
