Resumen de Bacteriemias de origen periodontal: validación de técnicas microbiológicas
Antecedentes: El paso de bacterias a sangre (bacteriemias) se ha postulado como uno de los posibles mecanismos responsables de la relación entre la periodontitis y ciertas enfermedades sistémicas. Sin embargo, los estudios publicados han encontrado resultados contradictorios en cuanto a datos de prevalencia y, además, son pocos los que detectan bacterias de origen periodontal. Esto puede ser debido al empleo de diferentes técnicas, pero ninguna de ellas validada para la detección de estas bacterias específicamente. Además, pocos son los estudios que buscan bacteriemia de origen periodontal que, a su vez, analicen y correlacionen los datos obtenidos en sangre con los obtenidos en muestras subgingivales. Por otro lado, se ha demostrado que la acumulación del biofilm y la inflamación gingival aumentan la prevalencia de bacteriemias tras manipulaciones bucodentales profesionales y no profesionales, lo que podría justificar el análisis de esas bacterias a nivel subgingival en estos pacientes.
Objetivos: Validar y comparar los resultados obtenidos con diferentes técnicas microbiológicas para la detección de patógenos clave en muestras de sangre (Estudios 1 y 2) y en muestras subgingivales (Estudios 3 y 4) para el estudio de bacteriemias de origen periodontal.
Material y métodos: Estudios 1 y 2: se obtuvieron muestras de sangre de voluntarios periodonalmente sanos que fueron contaminadas in vitro con concentraciones definidas de Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis y Streptococcus oralis. Las muestras fueron analizadas por cuatro técnicas: tres técnicas de cultivo [cultivo anaerobio directo (CAD), hemocultivo BACTEC y lisis centrifugación] y una técnica de biología molecular [reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qPCR)]. Las dos técnicas con mejores resultados fueron utilizadas en un estudio in vivo donde se analizaron muestras de sangre de pacientes periodontalmente sanos y con periodontitis antes y 1 minuto después del cepillado interdental, aplicado profesionalmente. También se recogieron muestras subgingivales.
Estudios 3 y 4: estudios in vitro e in vivo. Para el estudio in vitro se prepararon combinaciones de ADN de A. actinomycetemcomitans y P. gingivalis en concentraciones similares o diferentes. Para el estudio in vivo se utilizaron las muestras subgingivales, procedentes del Estudio 2. Las muestras fueron procesadas en paralelo por qPCR sencilla y qPCR múltiple, dirigidas a A. actinomycetemcomitans y P. gingivalis. Por otro lado, se obtuvieron, además, muestras subgingivales de pacientes con diferentes diagnósticos periodontales y en diferentes fases de tratamiento periodontal y fueron procesadas en paralelo por CAD y por qPCR múltiple dirigido a la detección y cuantificación simultáneas de A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis y Tannerella forsythia.
Resultados: Estudio 1 y 2: CAD y qPCR fueron las dos técnicas más apropiadas para la detección de bacterias patógenas periodontales in vitro en la sangre. El hemocultivo BACTEC no fue capaz de detectar dichas bacterias. Además, in vivo qPCR fue capaz de detectar tanto A. actinomycetemcomitans y P. gingivalis en dos pacientes con periodontitis.
Estudios 3 y 4: La técnica de qPCR múltiple fue capaz de cuantificar simultáneamente las bacterias patógenas periodontales. Además, en comparación con el CAD, mostró un alto grado de sensibilidad en la cuantificación simultánea de los tres patógenos periodontales.
Conclusiones: La detección de patógenos periodontales, tanto en muestras de sangre como en muestras subgingivales, requiere de procesamiento y técnicas validadas para su identificación y cuantificación. Parece que las técnicas utilizadas en microbiología periodontal, tales como el CAD o la qPCR, son las técnicas de elección en aquellos estudios en los que se quiera evaluar el paso de patógenos periodontales al torrente sanguíneo.
