Molecular and cellular mechanisms of fertilization failure after icsi
- Autores: Marc Torra Massana
- Directores de la Tesis: Rafael Oliva Virgili (dir. tes.), Rita Vassena (codir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2019
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: João Ramalho Santos (presid.), Judit Castillo Corullon (secret.), Andreas Abraham Zadeh (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Medicina e Investigación Traslacional por la Universidad de Barcelona
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: TESEO
- Resumen
La ICSI es una técnica de reproducción asistida muy eficiente, pero el fallo de fecundación (FF) puede ocurrir en un 1-3% de los ciclos. El FF tiene un elevado impacto en los pacientes y es muy difícil de predecir, diagnosticar y gestionar a nivel clínico. El objetivo de esta tesis es caracterizar e identificar los mecanismos espermáticos responsables del FF en ICSI.
Se estudiaron las principales proteínas espermáticas involucradas en la activación ovocltaria: PAWP y PLCZ1. Los niveles, locallzación y secuencia génica de PAWP no presentaron alteraciones en muestras de pacientes con FF. Por otro lado, encontramos un elevado porcentaje de pacientes con fallo de activación ovocitaria con mutaciones en PLCZl (12/22, 55%), y su efecto deletéreo se determinó mediante análisis funcional (inyectando cRNA de PLCZl en ovocitos humanos madurados in vitro).
Se determinó la longitud telomérica espermática (STL) en 60 muestras de donantes de semen utilizadas en 676 ciclos de ICSI, permitiéndonos aislar estadísticamente la STL del factor femenino. Sin embargo, no se encontraron efectos significativos de STL en tasas de fecundación y embarazo.
Además, se realizó el primer estudio de proteómica comparando muestras de semen con buena fecundación (n=S) y muestras con FF repetitivo post-ICSI (n=4). Este análisis permitió identificar 11 proteínas diferencialmente expresadas entre FF y controles, algunas de ellas validadas por western blot, como DLAT y PSMAl. Análisis funcionales adicionales determinaron que las muestras de pacientes con FF presentan menor actividad mltocondrial y menor actividad proteasomal que los controles.
Por último, analizando hasta 125 ciclos de ICSI con FF, pudimos observar que una sola evidencia previa de FF no es justificación suficiente para recomendar la activación ovocitaria asistida (AOA).
En resumen, esta tesis incluye una caracterización molecular exhaustiva de muestras de pacientes con FF, y aporta un listado de potenciales marcadores y herramientas a nivel clínico
