Transito intracelular de proteinas del islote pancreatico: secuencias estructurales involucradas en la destinacion al granulo secretor

• Autores: Elena Fernandez Usac
• Directores de la Tesis: Ramón Gomis (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 1997
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Joan Guinovart Cirera (presid.), Anna María Gómez Foix (secret.), Carles Enrich Bastús (voc.), Anna Novials Sardà (voc.), Ricardo Pujol-Borrell (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Biología molecular
  • Ciencias de la vida
    • Biología celular
      • Citología
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• Resumen

  • CONOCIENDO QUE LA DESTINACION DE LAS PROTEINAS HACIA EL GRANULO SECRETOR REQUIERE UNA SEÑAL POSITIVO CODIFICADO EN LA MISMA ESTRUCTURA PROTEICA Y, BASANDONOS EN EL HECHO QUE DOS PROTEINAS, LA PC2 Y LA FURINA, DE LOCALIZACION SUBCELULAR DIFERENTE (GRANULO SECRETOR Y RED DEL TRANS-GOLGI, RESPECTIVAMENTE), PRESENTAN UNA ELEVADA HOMOLOGIA ESTRUCTURAL EN LOS DOMINIOS AMINO TERMINAL Y CATALITICO, PERO SON DIVERGENTES EN LOS DOMINIOS CARBOXITERMINALES, NUESTRA HIPOTESIS DE TRABAJO SUPONE QUE LA PC2 PODRIA CONTENER, EN SU DOMINIO CARBOXITERMINAL, INFORMACION PARA DETERMINAR LA DESTINACION DE LA PROTEINA HACIA LA VIA DE SECRECION REGULADA.

    PARA DICHO ESTUDIO SE CONSTRUYERON HIBRIDOS ENTRE LA PC2 Y LA FURINA, MEDIANTE LA INSERCION, EN SUS CDNA, DE UNA UNICA SECUENCIA DE RESTRICCION EN LA PARTE CARBOXI TERMINAL DE LOS DOMINIOS CATALITICO Y MEDIO.

    POSTERIORMENTE MEDIANTE SUBCLONAJE SE INTERCAMBIARON LOS DOMINIOS. ESTO RESULTO EN LA CONSTRUCCION DE CUATRO FORMAS HIBRIDAS DISTINTAS, COMPUESTAS POR DOMINIOS DE FURINA Y PC2. ADEMAS SE CONSTRUYO UNA FORMA TRUNCADA, DE FURINA Y PC2, FALTANDOLES SOLO EL DOMINIO CARBOXI TERMINAL.

    LAS EXPRESIONES DE LAS CONSTRUCCIONES FUERON, PRIMERAMENTE, ANALIZADAS EN EXPERIMENTOS DE TRANSFECCION TRANSITORIA EN LA LINEA CELULAR DE RIÑON DE MONO, COS-7.

    A CONTINUACION, LAS CONSTRUCCIONES SE USARON EN TRANSFECCIONES ESTABLES DE LA LINEA CELULAR DE PITUITARIA DE RATON, ALT-20. SE ESTUDIO, EN ESTAS LINEAS CELULARES, LA LOCALIZACION SUBCELULAR, SU BIOSINTESIS Y MODIFICACIONES POSTTRADUCCIONALES, ASI COMO SU SECRECION.

    PARA ELLO SE UTILIZARON TECNICAS DE INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA, MICROSCOPIA ELECTRONICA, MARCAJE PROTEICO BREVE Y POSTERIOR SEGUIMIENTO (PULSE-CHASE), INMUNOPRECIPITACION, WESTERN BLOT, Y EL USO DE UN SECRETAGOGO PARA EL ESTUDIO DE LA SECRECION.

    LOS RESULTADOS OBTENIDOS INDICAN QUE LA ELIMINACION DE LOS ULTIMOS 50 AMINO ACIDOS DE LA PC2 IMPIDEN LA SALIDA DE LA PROTEINA DEL RETICULO ENDOPL