Resumen de Glicosintases: nous biocatalitzadors per a la síntesi enzimàtica d'oligosacàrids
El reconocimiento específico por oligosacáridos de los enzimas glicosidasas y glicosil transferasas es determinante en la bioquímica de carbohidratos y gliconjugados. Los conocimientos actuales de los enzimas glicosidasas obtenidos del análisis estructura-función ha permitido definir su mecanismo de acción y ha hecho posible su rediseño racional.
El rediseño de glicosidasas a glicosintasas que se desarrolló el año 1998 es una herramienta potencial para la síntesis regio y estereoespecífica de carbohidratos.
En el presente trabajo se estudia el mecanismo de la glicosintasa E134A derivada de la 1,3-1,4 beta-glucanasa de Bacillus licheniformis para conocer la maquinaria catalítica esencial de esta reacción y los distintos procesos que la acompañan, y se analiza la especificidad por dador y aceptor para establecer los distintos oligosacáridos posibles a obtener.
La dependencia de la reacción de condensación entre dador y aceptor frente el pH muestra que la reacción requiere asistencia de catálisis básica.
La modificación química del mutante con carbodiimida soluble en agua confirma que esta base es un grupo carboxilato. Por mutagénesis drigida y reactivación del correspondiente mutante inactivo se demuestra que le Glul138 es la base general en el mecanismo de esta glicosintasa.
El análisis cinético de los distintos procesos (reacciones de hidrólisis química y enzimática del dador fluoruro, la autocondensación del dador y la elongación) indica que la reacción de autocondensación es la principal reacción en competencia con la reacción de condensación dador y aceptor.
La actividad glicosintasa del mutante E134A es estrictamente específica.
Cataliza la transferencia de dadores tipo fluoruro de Beta-D-glucopiranosil 3-O-substituídos beta-1,4. Este enzima se aplica con éxito en la síntesis de 1,3-1,4-beta-oligo y polisacárido. Por un lado, la combinación de dos glicosintasas con distintas especi
