Resumen de Replicación de DNA del bacteriófago ø29. Caracterización del mecanismo de iniciación con proteina terminal
1. SE HA ESTUDIADO LA INTERACCION ENTRE LA DNA POLIMERASA DE 029 Y EL DNA UTILIZANDO LAS TECNICAS DE RETRASO EN GEL Y ENTRECRUZAMIENTO CON LUZ ULTRAVIOLETA. SE HA DEMOSTRADO QUE EL CATION MG2+ AUMENTA LA AFINIDAD DE LA DNA POLIMERASA POR EL DNA Y PARTICIPA EN LA ORIENTACION DEL EXTREMO DE LA CADENA INICIADORA EN EL SITIO ACTIVO DE POLIMERIZACION.
2. EL ANALISIS MUTACIONAL DEL MOTIVO TX2GR EN LA DNA POLIMERASA DE 029 HA PERMITIDO CONCLUIR QUE LOS AMINOACIDOS THR434 Y ARG438 SON CRITICO PARA LAS ACTIVIDADES SINTETICAS DEL ENZIMA. LOS DEFECTOS DE SINTESIS DNA POLIMERASS MUTANTES EN ESTOS RESIDUOS SE HAN PODIDO RELACIONAR CON UNA DISMINUCION DE SU CAPACIDAD DE UNION AL DNA Y A LA PROTEINA TERMINAL. EL ANALISIS DEL EQUILIBRIO ENTRE LAS ACTIVIDADES DE POLIMERIZACION Y EXONUCLEOLISIS HA LLEVADO A PROPONER PARA ESTE MOTIVO UN PAPEL EN LA ESTABILIZACION DEL EXTREMO DEL DNA INICIADOR EN EL CENTRO ACTIVO DE POLIMERIZACION.
3. SE HA DEMOSTRADO QUE EL COMPLEJO DNA POLIMERASA-PROTEINA TERMINAL PUEDE RECONOCER EL ORIGEN DE REPLICACION EN FORMA DE DNA DE CADENA SENCILLA, Y QUE LA REACCION DE INICIACION (FORMACION DEL COMPLEJO TP-DAMP) ES DIRIGIDA POR EL SEGUNDO NUCLEOTIDO DEL EXTREMO 3' DEL DNA. DURANTE LA POLIMERIZACION, TODAS LAS BASES DEL MOLDE (INCLUIDA LA TERMINAL) PARECEN SER REPLICADAS. SE HA PROPUESTO UN NUEVO MODELO (SLIDING-BACK) PARA LA TRANSICION ENTRE LA INICIACION CON PROTEINA Y LA ELONGACION, BASADA EN UNA TRANSLOCACION DEL COMPLEJO TP DAMP DESDE LA SEGUNDA BASE DEL MOLDE HASTA LA PRIMERA. DE ESTE MODO SE RECUPERA EL NUCLEOTIDO TERMINAL Y POSIBLEMENTE SE CONTRIBUYE A LA FIDELIDAD DE LOS PRIMEROS PASOS DE LA REPLICACION. EL HECHO DE QUE TODOS LOS GENOMAS DE DNA LINEAL CON PROTEINAS TERMINAL TENGAN ALUN TIPO DE REITERACION EN LOS EXTREMOS SUGIER QUE EL MECANISMO DE SLIDING-BACK PUEDA SER GENERALIZABLE A TODOS LOS SISTEMAS QUE UTILIZAN PROTEINA COMO INICIADOR DE LA REPLICACION.
