Aplicación de técnicas de PCR en tiempo real a la trazabilidad y autenticidad de los piensos

• Autores: Nicolette Pegels Rojas
• Directores de la Tesis: María del Rosario Martín de Santos (dir. tes.), María Isabel González Alonso (dir. tes.), Teresa García Lacarra (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2015
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Paloma Morales Gómez (presid.), Maria Esther Gil Alegre (secret.), Stavros Kalogiannis (voc.), J. J. Córdoba (voc.), Agustin Ariño Moneva (voc.)
• Materias:
  • Ciencias agrarias
    • Ciencias veterinarias
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Docta Complutense
• Resumen
  • español

    La trazabilidad y el correcto etiquetado de los piensos y sus ingredientes son factores esenciales para prevenir fraudes y garantizar la seguridad alimentaria. En esta Tesis Doctoral se han desarrollado técnicas de PCR en tiempo real con sondas TaqMan® para la detección de las siguientes especies y grupos de especies animales en piensos: vaca, oveja, cabra, grupo rumiante, cerdo, pollo, pavo, pato, oca, grupo aviar, caballo, conejo, liebre, grupo lepórido (conejo y liebre) y pescados. Para ello, se seleccionaron marcadores mitocondriales (región polimórfica D-loop y genes 12S y 16S ARNr y se diseñaron sistemas específicos (cebadores/sonda TaqMan® de PCR en tiempo real para la amplificación selectiva de fragmentos de ADN de pequeño tamaño entre 62 y 118 pb en todas las especies diana. Una vez comprobados los parámetros analíticos necesarios para la validación de las técnicas de PCR en tiempo real desarrolladas, se evaluó su aplicabilidad en el análisis de muestras reales de piensos destinados a animales de abasto. Los resultados obtenidos demostraron la capacidad de las técnicas para la detección específica de hasta un 0,1 % de las correspondientes especies diana en todas las muestras procesadas a 133 °C. Asimismo, el análisis cuantitativo de los datos indicó que el tipo de procesado térmico y el tejido animal presente en la muestra influían en los valores de cuantificación. Los sistemas específicos de PCR desarrollados también se aplicaron al análisis de piensos comerciales para mascotas, demostrando su capacidad para detectar pequeños porcentajes de las especies diana. Finalmente, se evaluó el potencial de marcadores epigenéticos basados en la metilación del ADN para la identificación y diferenciación de tejidos procedentes de ingredientes autorizados y prohibidos en los piensos. Se puede concluir que las técnicas genéticas desarrolladas en este trabajo proporcionan herramientas específicas y sensibles ara el control de autenticidad de piensos.

  • English

    Traceability and correct labeling of feed are essential issues to prevent frauds and to avoid potential safety risks caused by introduction of any food ingredient that might be harmful to human andior animal health. In the context of transmissible spongiform encephalopathies (TSEs) eradication programs, the European Union (EU) has established a ban on the use of processed animal proteins (PAPS) in feeds for farmed animals, with certain limited exceptions. Moreover, material derived from animals should not be fed to animals of the species from which it is derived (intra-species recycling ban). In this context, to ensure the proper accomplishment of the legislation in force, sensitive and reliable analytical techniques that can identify the source of all ingredients present in feeds are of prime importance. The microscopic official method, based on the detection of animal bone fragments, can detect animal proteins at sufficiently low levels (0.1 %). However, this method is time consuming, requires specialized staff and it does not allow the determination of the species origin of the feed, limiting the identification essentially to the animal class. As consequence, in the latest years the EU has prompted the use of alternative methods to improve detection and gain precise information on feed species composition. Considering these aspects, the aim of this PhD Thesis was the development of TaqMan real-time PCR methodologies for authenticity and traceability control of animal ingredients used in feed formulations. The species targeted in this work were: cow (Bos taurus), sheep (Ovis cries), goat (Capra hircus), ruminant group, swine (Sus scrofa), chicken (Gallus gallus), turkey (Meleagris gallopavo), duck (Arras platyrhynchos x Cairina moschata), goose (Anser anser), avian group, horse (Equus caballus), rabbit (Oryctolagus cuniculus), hare (Lepus capensis), leporid group (rabbit and hare) and fish ...