Nuevas herramientas para el análisis de interacciones y adquisición automatizada inteligente en microscopía óptica

• Autores: Diego Megias Vazquez
• Directores de la Tesis: María Concepción Montoya Sánchez (dir. tes.), Luis del Peso Ovalle (tut. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2016
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: María del Carmen Risueño Almeida (presid.), Francisco Javier Díez Guerra (secret.), Timo Zimmermann (voc.), Wolfgang Link (voc.), Jerónimo Bravo Sicilia (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Química analítica
      • Microscopia
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • La comunidad científica necesita de nuevas tecnologías y métodos que permitan profundizar en el entendimiento de los distintos procesos biológicos.

    En esta tesis presentamos nuevos abordajes en microscopía óptica que permiten resolver algunas de las limitaciones existentes en este campo.

    Por una parte, presentamos el desarrollo de un nuevo método denominado FRET que posibilita medir la interacción entre moléculas utilizando el fenómeno de transferencia de energía de la fluorescencia por resonancia, que permite resolver muchas de las limitaciones de los métodos existentes, haciendo este tipo de estudios más fiables y sensibles cuando se compara con algunos de los métodos más usados. Este nuevo método ha sido validado en estudios de interacción entre las moléculas CD44 y MT1-MMP, demostrando su utilidad en el campo.

    Aun así, el mayor inconveniente de dicho tipo de ensayos y en general de las adquisiciones de imagen complejas es el gran consumo de tiempo y recursos. Las opciones disponibles de automatización son aún muy básicas y poco eficientes. Por ejemplo, las técnicas de screening convencional (o adquisición aleatoria automatizada) necesitan de muestras homogéneas y con una localización estandarizada que muchas veces resulta imposible de conseguir en biología, ya sea por la baja frecuencia del evento de estudio como por su heterogeneidad.

    En este trabajo presentamos también el desarrollo y validación de una nueva técnica de “screening inteligente” denominado iMSRC (Intelligent Matrix Screening Remote Control) que posibilita realizar de forma fácil e intuitiva la adquisición de imágenes dirigida por análisis de imagen automatizada en microscopios de fluorescencia estándar y en microscopios confocales. Esta nueva herramienta permite la realización de estudios de microscopía óptica basados en la localización de eventos de baja frecuencia en una muestra y otros ensayos complejos, que antes eran prácticamente inviables.