Resumen de Estudio Sistemático para la Determinación de Aminoácidos Plasmáticos

Jaime Restrepo Osorio, Ana Julia Colmenares Dulcey, Sócrates Herrera

• español

  Se empleó la Cromatografía Líquida de Alta Resolución, en fase reversa, para la separación de 17 feniltiocarbamil-derivados de aminoácidos plasmáticos en 20 minutos. Este método utilizó una columna C18 Waters Pico Tag (300x3,9 mm, 3μm) a una temperatura constante de 38 °C y un gradiente multietapas simple de dos solventes. El solvente A fue una mezcla 0.150 M de acetato de sodio (pH 6.4)- acetonitrilo (96:6 v/v) y el solvente B fue agua-acetonitrilo (40:60, v/v). En la fase inicial, la programación del gradiente, la temperatura de la columna, el flujo y la composición de la fase móvil fueron optimizadas. Al final del estudio, se evaluó la influencia de la liofilización, en lugar de la aplicación de alto vacío, en el tratamiento previo de la muestra y de las soluciones estándar, lo cual condujo a una excelente resolución de los 17 aminoácidos. El método fue validado por exactitud (90% de recuperación), precisión (%RSD < 5%) y linealidad (r=0.996). Los límites de detección y cuantificación fueron 0.46 y 1.54 μM para la cisteína (Cys) y 1.42 y 4.57 μM para la leucina (Leu), respectivamente. Esta técnica resulta eficaz para evaluar el verdadero valor nutricional y composición de aminoácidos en materias primas, productos alimenticios procesados y su biodisponibilidad en humanos.

• English

  A reversed-phase liquid chromatography (HPLC) method for the separation of 17 phenylthiocarbamyl derivatives of amino acids in human plasma in about 20 min is described. In this method, we used a C18, Waters Pico Tag column (300x3.9 mm, 3 μm) thermostated at 38 °C, and a simple multistep linear gradient of two solvents. Solvent A was 0.150 M sodium acetate (pH6.40)-acetonitrile (96:6 v/v) and solvent B was water-acetontrile (40:60, v/v). In the initial phase of development, the composition of the gradient, its timings, column temperature, flow rate, and mobile phase compositions were optimized. At the end of the studio, the influence of the lyophilization instead of High-Vaccum in samples pre-tratment and the standard solutions were studied, and this approach led to an excellent resolution of the 17 aminoacids. The method was validated for accuracy (90% recovery), precision (% RSD < 5%) and linearity (r=0.996); detectionand quantification limits were 0.46 and 1.54 μM in cystein (Cys), 1.42, and 4.57 μM in leucine (Leu), respectively. This technique is effective to evaluate the true nutritional value and composition of amino acids in raw material, food products processed and bioavailability in human being.