Producción de anticuerpos policlonales IgG contra una proteína con actividad de óxido nítrico sintetasa de Toxoplasma gondii recombinante (NOS-Tg-r) y marcación inmunológica en taquizoítos

• Autores: Jonathan Mauricio Padilla Londoño, Juanita Trejos Suárez, Sandra Milena Coronado, Néstor Iván Cardona Pérez
• Localización: Infectio: Revista de la Asociación Colombiana de Infectología, ISSN-e 2422-3794, ISSN 0123-9392, Vol. 12, Nº. 2, 2008
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Production of Polyclonal Antibodies against Toxoplasma gondii Recombinant protein with Nitric Oxide Synthase activity and immunologic marking in Tachyzoites
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    La enzima óxido nítrico sintetasa ha sido estudiada en mamíferos; en los últimos años se ha descrito que existe también en protozoos, pero se desconocen aspectos im­portantes de su función.Se logró producir anticuerpos policlonales contra la proteí­na recombinante con actividad de óxido nítrico sintetasa (NOS-Tg-r) de Toxoplasma gondii y realizar marcación in­munológica en taquizoítos. Se usaron dos conejos Nueva Zelanda (Oryctolagus cuniculus) que se inmunizaron por vía intramuscular con NOS-Tg-r, y dos tipos de adyuvantes, hi­dróxido de aluminio y adyuvante de Freund. Se comprobó la presencia de anticuerpos policlonales con la técnica de ensayo inmunoenzimático indirecto.Los resultados obtenidos mostraron que la NOS-Tg-r con adyuvante de Freund indujo mayor respuesta inmune que la de la NOS-Tg-r con hidróxido de aluminio (p ?0,005). Pa­ra verificar si había reacción cruzada, se realizó una prue­ba ELISA utilizando como antígenos: metaloproteasa de T. gondii recombinante, cisteína proteasa 5 de Entamoeba histolytica recombinante, albúmina al 2%, hidróxido de aluminio y adyuvante de Freund.

  • English

    The nitric oxide synthase (NOS) is an enzyme well described on mammals but little is known about the role of these enzymes on pathogenic parasites. We produced polyclonal antibodies against a recombinant NOS enzyme from Toxoplasma gondii and we also performed an immunolocalization of the enzyme on tachyzoites.We used two New Zealand rabbits (Oryctolagus cuniculus) to perform intramuscular immunization and we used two types of adjuvant: aluminum hydroxide and Freund’s adjuvant. We tested the generation of polyclonal antibodies by an indirect ELISA assay.The results showed that levels of antibodies were higher in rabbits immunized with Freund’s adjuvant than with aluminum hydroxide (p ?0.005). In order to test cross reactions, we used a recombinant Toxoplasma metalloprotease, a recombinant cysteine protease from Entamoeba histolytica, albumin 2%, hydroxide aluminium and Freund’s adjuvant as antigens on indirect ELISA assays for the polyclonal serum antibodies.No serum showed absorbances higher than the cutoff level with these antigens, indicating that the polyclonal antibodies were specific for recombinant Toxoplasma NOS. Additionally, we performed immunodetection of the enzyme on Toxoplasma gondii tachyzoites and we obtained a diffuse labeling of the parasite.