Resumen de Aplicación de la técnica PCR-RFLP en la identificación de nematodos implicados en la anisakiasis humana
Guadalupe Ortiz, Florencio Martínez Ubeira, María Flores, Elena García Fernández, Esperanza Rodríguez, Teresa Gárate Ayastuy, Maria Jesus Perteguer Prieto
Fundamento y objetivo: Desarrollo de una técnica molecular que permita la identificación específica de especie de anisákidos parásitos humanos con el mínimo de muestra, independientemente de su estado evolutivo. Material y método: Se utilizaron larvas de nematodos obtenidas de pescados para el consumo humano. Se realizó reacción en cadena de la polimerasa con análisis del polimorfismo de los fragmentos de restricción (PCR-RFLP). Para ello se amplificó el ADN de anisákidos correspondiente a las regiones ITS-1, gen del ARN ribosomal 5.8S, ITS-2 y aproximadamente 70 pares de bases del gen del ARN ribosomal 28S, incluyéndose un control de reacción interno. Los productos se digirieron posteriormente con la endonucleasa Taq I y por otra parte se secuenciaron. Resultados: Se obtuvieron patrones de amplificación (fragmentos de 960 y 1.010 pb) y restricción diferentes según la especie de anisákido (Anisakis simplex/Hysterothylacium aduncum), que coincidieron con los ya descritos para los mismos parásitos pero de otras procedencias geográficas, y se confirmó una divergencia genómica. Conclusiones: La especificidad del ensayo y la alta sensibilidad de la técnica, así como la ausencia de variaciones intraespecíficas, confirman la utilidad de esta prueba en la identificación de parásitos causantes de la anisakiasis humana, tanto en biopsias como a partir de las larvas extirpadas.
