Método de extracción de la pectina metilesterasa (EC 3.1.1.11) en frutos de níspero
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Angela M. Bedoya Gómez [1] ; Catalina M. Ramis Jaume [2] ; Luis R. Angulo Graterol [2] ; Yreny K. De Faria Muñoz [2] ; Antero R. Burgos Pérez [1]
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[1] Universidad Pedagógica Experimental Libertador
Universidad Pedagógica Experimental Libertador
Venezuela
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[2] Universidad Central de Venezuela
Universidad Central de Venezuela
Venezuela
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- Localización: Agronomía Tropical, ISSN 0002-192X, Vol. 64, Nº. 3-4, 2014, págs. 155-164
- Idioma: español
- Títulos paralelos:
- Design extraction method pectin methylesterase (EC 3.1.1.11) in sapodilla fruit
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Resumen
- español
El níspero (Manilkara zapota [L.] ‘Prolifi c’) es un fruto cuyas difi cultades de manejo postcosecha ha limitado su comercialización. Durante la maduración del fruto el cambio más drástico es la pérdida de fi rmeza, lo cual ocasiona la disminución de la calidad. Este ablandamiento está asociado a la acción de la pectina metilesterasa (PME, E.C. 3.1.1.11), la cual es una enzima que induce la degradación de la pared celular. El objetivo del trabajo fue diseñar un método de extracción de PME efi ciente, de calidad, rápido y que utilice pocos reactivos. Se utilizaron frutos de níspero en estado de madurez fi siológica del Banco de Germoplasma INIA-CENIAP, estado Aragua, almacenados a -20 °C. Se diseñaron cinco métodos de extracción:
Buffer Tris Hcl; Buffer PBS; Nitrógeno líquido (N2 L); Buffer Tris HCl + N2 L y NaCl. Se evaluaron los métodos en función de la calidad de la enzima;
cantidad (mg mL-1 de proteína) y de extracción. En el análisis de varianza se detectaron diferencias altamente signifi cativas (P<0,01) entre los métodos. La prueba de comparación entre medias de Duncan determinó que el Método de N2 L extrajo mayor cantidad de proteína (231 mg ml- 1 ) con una actividad catalítica de 1,97 µmol ácido min-1, superando al grupo y control con valores que oscilan entre 0,13 µmol ácido min-1 y 0,6 µmol ácido min-1; siendo entonces, el método más efi ciente, con mayor rendimiento y menor tiempo (dos horas). Se recomienda la purifi cación y caracterización de la PME con fi nes de aplicación agroindustrial y biotecnológico
- English
Sapodilla (Manilkara zapota [L.] ‘Prolifi c’) is a fruit whose diffi culties of post-harvest management have limited its commercialization. During ripenning of these fruits the most dramatic change is the loss of fi rmness, which causes the decrease in quality.
This softening is associated with the action of the pectin methylesterase (PME, E.C. 3.1.1.11), which is an enzyme that induce degradation of the cell wall. The objective was to design a method for effi cient extraction of PME, with high quality, fast and using few reagents. Physiologically ripen Sapodilla fruits from the Germplasm Bank INIACENIAP, Maracay, Aragua state, were used. They were stored at -20 °C. Five methods of extraction Buffer Tris HCl; Buffer PBS; Liquid nitrogen (N2 L);
Buffer Tris HCl + N2 L and NaCl, were designed.
Methods were evaluated according to enzyme quality, amount (mg mL-1 protein) and extraction.
The analysis of variance showed highly signifi cant differences (P<0.01) among the methods and Duncan mean comparisons determined that the liquid nitrogen method extracted more protein (231 mg ml-1) with a catalytic activity of 1.97 µmol acid min-1, excelling the other methods and the control with values ranging from 0.13 µmol acid min-1 up to 0.6 µmol acid min-1. Therefore, the C method is the most effi cient, with higher protein yield and lower time (two hours). However, purifi cation and characterization of PME for either agroindustrial purposes or biotechnological application is recommended
- español
