La fibrosis y disfunción mitocondrial en el daño renal inducido por ácido fólico revierte con la delección de ILK

• Serna Soto, Mariano de la ^[1] ; Martos Elvira, María ^[1] ; Moreno Piedra, Ariadna ^[1] ; Asenjo Bueno, Ana ^[1] ; Gutiérrez Calabrés, Elena ^[1] ; Ruiz Velázquez, Sara ^[1] ; García Villoria, Sergio ^[1] ; López Ongil, Susana ^[1] ; Olmos, Gemma ^[1] ; Frutos, Sergio de ^[1] ; Ruiz Torres, María Piedad ^[1] ; Calleros, Laura ^[1]
  1. [1] Universidad de Alcalá

     Universidad de Alcalá

     Alcalá de Henares, España

     
• Localización: Dianas: revista de dianas terapéuticas, ISSN-e 1886-8746, Vol. 13, Nº. 1, 2024 (Ejemplar dedicado a: Actas del IX Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2024 / coord. por María José Carmena Sierra, Alberto Domingo Galán)
• Idioma: español
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• Resumen

  • Integrin-linked kinase (ILK) es una proteína importante de andamiaje entre la matriz extracelular y las vías de señalización intracelular, está involucrada en varios procesos fisiopatológicos durante el daño renal. Existen pocos estudios sobre la disfunción mitocondrial que se produce en el modelo animal de nefropatía inducida por ácido fólico (FAN), así como en células renales humanas (HK-2) tratadas con ácido fólico (FA). El objetivo de este trabajo es el estudio del papel de ILK en la fibrosis intersticial renal asociada a la disfunción mitocondrial que aparece durante la transición de daño renal agudo (AKI) a crónico (CKD). Se realizó mediante la inyección intraperitoneal de tamoxifeno (1,5 mg/Kg) la delección condicional de ILK (cKD-ILK) y se inyectó intraperitonealmente una dosis única de FA (250 mg/Kg) disuelta en Bicarbonato de Sodio (0,3 mmol/L) a ratones macho de la cepa C57BL/6 con su posterior sacrificio a los 15 días. La línea celular HK2 fue transfectada con un siRNA específico de ILK y después fue tratada con una dosis de 10mM de FA durante 24 horas. Se determinó la expresión de ILK, proteínas de matriz extracelular (Fibronectina: FN y colágeno tipo I: COL1A1), la citoquina profibrótica TGF-β1 y los complejos de la cadena de transporte de electrones mitocondrial (CI: NADPH Deshidrogenasa, CII: Succinato Deshidrogenasa, CIII: Coenzima Q, CIV: Citocromo C Oxidasa y CV: ATP Sintasa) por Western Blot, así como las actividades del CIV y la Citrato Sintasa (CS) por kits colorimétricos en ambos modelos. El análisis estadístico fue realizado mediante pruebas no paramétricas con el test de Kruskal-Wallis y con su consecuente comparación por pares con el test de Mann-Whitney. La expresión de ILK aumenta en la corteza renal de ratones WT tratados con FA, lo que no ocurre en el grupo cKD-ILK FA. Además, observamos un aumento de marcadores fibróticos (FN, COL1A1) y TGF-β en el grupo WT FA, que fue significativamente menor en el grupo cKD-ILK FA. En cuanto a los complejos mitocondriales, observamos una disminución proteica en el grupo WT FA y el contenido de CI y CIV se recuperaron parcialmente después de la delección de ILK. Lo mismo ocurre con la actividad del CIV y CS tanto en ratones como en las células HK-2. Estos datos sugieren que la proteína ILK juega un papel relevante en el desarrollo de la enfermedad renal y la consecuente disfunción mitocondrial, porque al deleccionar dicha proteína previene tanto la disfunción mitocondrial como el desarrollo de fibrosis en el modelo de FA in vivo e in vitro. Los próximos estudios tendrán como objetivo explorar los mecanismos por el cual ILK actúa en esta disfunción mitocondrial y la fibrosis.