Resumen de Rabbit polyclonal antibody against Erns protein for the detection of Classical Swine Fever Virus

Jose Miguel Fernández Torres, Yeosvany Cabrera Artiles, Onel Valdivia Pérez, María Teresa Barceló, Daymi Abreu Remedios, Duniesky Martínez García, Joel Pérez Paz, Enrique Pérez Cruz, Raúl Armas Ramos

• español

  La peste porcina clásica (PPC) es una enfermedad endémica en numerosos países. Una herramienta clave para la confirmación en laboratorio de la PPC es el diagnóstico diferencial entre cerdos vacunados y los que están realmente infectados. Muchos ensayos inmunoadsorbentes ligados a enzima (ELISA) están basados en la captura de anticuerpos en los sueros, pero estos ensayos no pueden utilizarse en aquellos animales que están persistentemente infectados. En tales casos, un ELISA de captura de antígeno podría ser una buena elección para diferenciar los animales vacunados de aquellos que están infectados. Con el objetivo de producir un anticuerpo policlonal que permita esta técnica, se inmunizaron dos conejos con proteína Erns recombinante. El anticuerpo fue conjugado a peroxidasa de rábano picante (HRP) y la dilución óptima de trabajo fue de 1:64 000 en un ELISA directo. Se evaluaron diferentes condiciones de recubrimiento para atrapar Erns recombinante en un ELISA y se concluyó que el recubrimiento a 10 μg/mL aseguraría mayor captura. En el ELISA se pudo detectar la Erns de una mezcla de sueros de cerdos vacunados con la cepa china del virus de la peste porcina clásica (VPPC). Además, no se observó reacción en sueros de animales sanos ni con sueros de animales vacunados con Porvac®, vacuna de subunidad basada en la glicoproteína E2. Se concluyó que el anticuerpo policlonal generado puede reconocer la proteína Erns viral en sueros porcinos y que podría ser utilizado en un ELISA sándwich para el diagnóstico de la PPC, en aquellos animales persistentemente infectados o inmunodeprimidos.

• English

  Classical swine fever (CSF) is an endemic disease in many countries. A key tool for laboratory confirmation of CSF is a differential diagnosis between vaccinated and actually infected pigs. Many enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) are based on the capture of antibodies in animal sera, but these tests cannot be used in animals that are persistently infected. In these cases, an antigen-capture ELISA may be a good choice to differentiate vaccinated animals from those that are infected. In order to produce a polyclonal antibody that allows this technique, two rabbits were immunized with recombinant Erns protein. The antibody was conjugated to horseradish peroxidase (HRP) and the optimal working dilution was 1:64 000 in a direct ELISA. Different coating conditions were evaluated to trap recombinant Erns in a sandwich ELISA and it was concluded that coating at 10 μg/mL would ensure greater capture. The ELISA was able to detect Erns from a mixture of sera from pigs vaccinated with the Chinese strain of classical swine fever virus (CSFV). In addition, no reaction was observed in sera from healthy animals or in sera from animals vaccinated with Porvac®, an E2 protein subunit vaccine. It was concluded that the generated polyclonal antibody can recognize the viral Erns protein in pig sera, so it could be used in a sandwich ELISA to differentiate healthy animals from those infected with CSFV.