Caracterización bioquímica y molecular de la haloproteasa CP1 producida por "Pseudoalteromonas ruthenica"

• Autores: Cristina Sánchez-Porro Álvarez
• Directores de la Tesis: Maria Encarnación Mellado Durán (dir. tes.), Antonio Ventosa Ucero (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Sevilla ( España ) en 2005
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Francisco Rodríguez Valera (presid.), Carmen Vargas Macías (secret.), Josep Casadesús Pursals (voc.), Olivera Francetic (voc.), José Berenguer Carlos (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Idus
• Resumen

  • Los microorganismos halófilos moderados son capaces de crecer óptimamente en medios que contienen de 0,5 a 2,5 M de NaCl. Estos microorganismos son capaces de producir una serie de enzimas extracelulares de gran interés industrial, como proteasas, lipasas, DNAsas, amilasas, etc., que presentan gran estabilidad al estrés salino. En esta Tesis se ha estudiado en detalle un microorganismo halófilo moderado capaz de producir una proteasas extracelular.

    En primer lugar se realizó un screening en salinas del Sur de España que nos permitió aislar 892 bacteria halófilas moderadas capaces de producir enzimas extracelulares. De ellas se seleccionó la cepa CP76 como la mejor productora de una proteasas extracelular que se caracterizó en base a estudios genotípicos y fenotípicos y se clasificó como Pseudoalteromonas ruthenica CP76.

    Dicha proteasas, denominada haloproteasas CP1, ha sido purificada y caracterizada bioquímicamente. Se trata de un enzima de 38 kDa que presenta una actividad óptima a 55ºC, pH 8,5 y es capaz de actuar en un amplio rango de concentraciones de NaCl (0-4 M) con un óptimo entre 0-1 M.

    Mediante PCr inversa se ha amplificado el gen que codifica la haloproteasas CP1, denominado cp1. La haloproteasas CP1 consta de 733 aminoácidos y se sintetiza en forma de pre-proproteína. Se trata de una metalopróteasa de la familia de las termolisinas o M4. Junto al gen cp1 se ha encontrado otro gen, cp2, que codifica otra metaloproteasas extracelular, denominada CP2, que esta formada por 614 aminoácidos y pertenece a la familia M28. Por último, corriente debajo de cp2, se encuentra otro gen, denominado lipP, que aunque está incompleto codifica que proteína que presenta homología con esteasas de la familia de las a/betas hidrolasas.

    Por último se han realizado estudios sobre el mecanismo de secreción que utiliza Pseudoalteromonas ruthenica CP76 para secretar la haloproteasas CP1 al medio extracelular. Para ello se ha amplifi