Cebadores para la amplificación del gen de la (1,3)-ß-glucano sintasa y caracterización parcial de la enzima en "Ganoderma lucidum"

• Autores: Jessica Valeria Guerrero Torres, Gerardo Mata, Daniel Martínez Carrera, Claudio Garibay Orijel, Roberto Garibay Orijel
• Localización: Revista Iberoamericana de Micología, ISSN 1130-1406, Vol. 30, Nº. 4, 2013, págs. 267-270
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    Antecedentes El ß-(1,3)(1,6)-D-glucano es un compuesto de la pared celular de los hongos que presenta efectos inmunomoduladores y anticancerígenos. La (1,3)-ß-glucano sintasa es una de las principales enzimas involucradas en su síntesis.

    Objetivos Diseñar cebadores para amplificar y caracterizar parcialmente el gen correspondiente a la enzima (1,3)-ß-glucano sintasa y probarlos en la cepa CP-132 de Ganoderma lucidum.

    Métodos Los cebadores fueron diseñados realizando una búsqueda de la secuencia del gen en otros hongos. Después, con la técnica de PCR se probaron los cebadores utilizando ADN extraído de la cepa CP-382 de G. lucidum. Las secuencias obtenidas se compararon con aquellas de la base de datos del GenBank.

    Resultados Se diseñaron 3 pares de cebadores. Todos los pares amplificaron productos de PCR de tamaño esperado. Las secuencias amplificadas con los pares BGS2113UmF y BGS3097UmR, y BGS547UmF y BGS2113UmR correspondieron a un par de secciones del gen de la (1,3)-ß-glucano sintasa. Las secuencias deducidas de aminoácidos mostraron una similitud alta con genes homólogos de otros hongos, especialmente con aquellos de la clase Agaricomycetes.

    Conclusiones El diseño de cebadores para amplificar parcialmente el gen de la (1,3)-ß-glucano sintasa a partir de secuencias de genes homólogos fue exitoso. Estos cebadores permitirán en un futuro la caracterización de esta importante enzima en un amplio grupo de hongos.

  • English

    Background ß-(1,3)(1,6)-D-glucan is fungal cell wall component that has demonstrated immunomodulatory and anti-cancer effects. The (1,3)-ß-glucan synthase is one of the main enzymes involved in its biosynthesis.

    Aims To design primers to partially amplify and characterize the (1,3)-ß-glucan synthase gene and to determine them in Ganoderma lucidum (G. Lucidum) strain CP-132.

    Methods The primers were designed on the basis of homologous genes in other fungi. Then, using the PCR technique, primers were tested using DNA extracted from the G. lucidum strain CP-382. Amplified sequences were compared with those from the GenBank.

    Results Three primer pairs were designed; all of them produced amplicons of the expected size. The sequences obtained with primer pairs BGS2113UmF and BGS3097UmR, and BGS547UmF and BGS2113UmR matched with 2 sections of the (1,3)-ß-glucan synthase gene. The deduced amino acid sequences showed high similarity with homologous genes from other fungi, particularly with those of the Agaricomycetes class.

    Conclusions The primer design to partially amplify the (1,3)-ß-glucan synthase gene of G. lucidum using sequences from homologous genes was successful. These primers will allow to characterize this important enzyme in a wide group of fungi.